ABO血型鉴定及交叉配血中出现错误常常是致命的,所以我们要随时保持警惕。
1、分型血清方面的原因
(1)自制分型血清抗体:效价太低、亲和力不强,造成定型不准确。
(2)患者纤维蛋白原增高或为异常蛋白血症:如多发性骨髓瘤,巨球蛋白血症等,可产生缗线状假凝集。新生儿脐血中含有华顿胶或操作中使用了质量差的玻璃管(瓶),误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。
(3)患者输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物:可引起红细胞聚集,易误认为凝集。
(4)血清中可能存在的不规则抗体:如A2和A2B型患者血清内有抗A1抗体,能凝集A1红细胞。此外还有抗Ⅰ抗体等。有些癌症患者(如胃癌、胰腺癌等)血中含有大量可溶性A或B物质,这些物质可中和抗血清的抗体,从而抑制反应。造成假性不凝集。克服的办法是红细胞先洗涤后再试验。
(5)婴儿尚未产生自己的抗体或有从母亲获得的血型抗体:新生儿不宜用血清作反定型。
(6)老年人血型抗体水平下降:某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病,遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者,由于免疫球蛋白下降,血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定型医学教育网收集整理错误。
2、红细胞方面的原因
(1)用近期内输过血的患者血液做对照红细胞:此时,患者血液红细胞为混合型细胞。
(2)患者红细胞被大量抗体包被:例如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞,或红细胞悬浮于高浓度蛋白的介质中,红细胞都会自发地发生凝集。
(3)红细胞膜有遗传性或获得性异常。
(4)抗原变异:A或B的弱抗原易判为不凝集(假阴性),而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。有些细菌含有乙酰基酶,能使特异性A型物质末端的N-乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖,从而使A型获得类B抗原后易误定为AB型。由于患白血病或某些恶性肿瘤使A或B抗原变弱。婴儿及老年人的红细胞抗原也较青壮年为弱。
(5)血清中有高浓度血型物质:当用血清配制红细胞悬液时,血型物质则会中和分型血清中的抗体,而不再与红细胞抗原起反应。
(6)红细胞被细菌污染:细菌的酶消化了红细胞表面的唾液酸,医学教育网收集整理暴露了人人都有的T抗原,被具有抗T活性的IgM凝集。
(7)嵌合体现象:混合细胞群见于异卵双生子。如,有98%O型红细胞,2%B型红细胞会定为O型,但血清中只有抗A抗体。
3、操作方面的原因:是更常见原因。
(1)操作器材:玻璃器皿不洁或使用了严重污染的血清、红细胞,可出现假阳性。试管污染洗涤剂会造成假阴性。
(2)红细胞与血清比例和离心:红细胞与血清比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。
(3)溶血现象:误认为溶血现象为阴性结果。
(4)试验温度:温度过高会造成假阴性。ABO血型系统的IgM抗体更适温度为4℃~22℃,如达37℃凝集力即下降。
(5)信息记录差错:标本、试剂、标签、加样弄错,或出现记录错误。大批标本检查时搞错标本,张冠李戴更易造成错误。
ABO血型系统是更早发现也是输血中更重要的血型系统,其在血液遗传学和临床输血的过程中具有非常重大的意义,正确的ABO血型鉴定是临床安全输血的关键,如果血型鉴定错误的话,可能导致受血者血液排异,危及患者的生命安全,从而造成不可避免的损害。血型鉴定在技术及实验条件上并不复杂,但影响血型鉴定的客观和主观因素较多,稍不注意即可引起定型错误。对定型中出现正反定型不一致时,要分析导致不一致的原因才能准确定型,保障输血安全。
以下是对影响血型鉴定因素进行的总结分析:
一、实验操作不当
①标签问题(缺失信息、不贴、贴错);
②标本混淆(采错、实验拿错、互相混淆);
③静脉输液处采样,ABO抗体稀释干扰反定型;
④标本采样量不足;
⑤标本溶血;
⑥实验操作不当:a用凝血块洗下的红细胞做正定型,其中混有凝集程度不一的红细胞; b用抗凝不充分的血浆做反定型,纤维蛋白析出“网住”试剂红细胞;c实验操作不当,喷溅标本互相污染;d实验人员漏加试剂。
二、生理性因素
①老年人ABO 抗原或抗体减弱;
②6个月前婴儿血型抗原不成熟,ABO天然抗体未产生;
③ABO亚型;
④自身冷抗体。
三、临床治疗的影响
①脉输高分子药物,致红细胞呈钱串状,干扰结果判定;
②静脉注射丙种球蛋白;
③骨髓移植;
四、疾病影响
①恶性肿瘤;
②急性白血病;
③血浆蛋白异常;
④多发性骨髓瘤;
⑤骨髓造血异常综合征;
⑥免疫缺陷病患者
⑦自身免疫性溶血性贫血;
⑧先天性无丙种球蛋白血症
⑨不规则抗体
⑩低效价低亲和力抗体
综上所述,在对患者进行血型鉴定时,如果血型检测结果发生不相符合的结果时,千万不能轻易的评定患者血型,否则很容易导致血型鉴定错误,造成不可挽回的结果。同时,血型鉴定是一项具有高度科学性和高度责任性的工作,鉴定结果正确与否直接影响输血安全,要严格按照规范化、标准化的工作流程,严格执行对关键环节的控制。 血型检测人员要具备端正、认真负责的工作态度,在工作中还要不断累积血型鉴定的经验,对于容易造成鉴定错误的因素要积极排除,一旦发现异常结果时,要仔细查明原因,确保血型鉴定的准确性,从而提高临床输血的安全性,以保护受血者的生命。
1、影响血型鉴定常见的问题及处理方法,卢艳 2012.8.31,准确的血型鉴定是临床安全有效输血的重要保证,使输血的成分能在受着体内有效存活,无不良反应,即输入的红细胞在受着体内必须不凝集不溶血,输入的血浆成分不导致受者自身红细胞显著破坏,才能使受者获得恢复健康所需的血液。,ABO定型试验中常见的问题: 一、标本问题 二、试剂问题 三、实验者操作技术的错误 四、红细胞标本问题 五、血清标本的问题,一、标本问题,血型鉴定血液标本的严格要求是安全输血的关键性措施之一,首先对标本进行科学管理,确保标本一一对应防止“张冠李戴”。 1、所用标本要能够恰当反映受血者目前的免疫学状态。 2、受血者配血试验的血标
2、本必须是输血前3天内采集的。 3、如果受血者需要再次输注红细胞,尤其是受血者更后一次输注红细胞间隔了24小时,应重新采集一份血样进行交叉配血试验,防止新的不规则抗体产生。,二、试剂问题,血型定型试剂是做好定型的基础。现在单克隆试剂是通过杂交瘤技术生产的,其效价、特异性、亲和力都较人血清有很大进步,但试剂的运输、贮存等条件不适可导致试剂变质失效,造成鉴定错误。在实验前进行试剂外观、效价等项目质量控制。不同抗凝剂的血液制备的标准红细胞质量也不同,各实验依据要求正确配制红细胞浓度。,三、实验者操作技术错误,1、造成假阴性结果原因: (1)未加入抗体或血清 (2)未识别溶血 (3)血清与红细胞比例不
3、当 (4)离心速度、时间不够 (5)使用失效或错误试剂 (6)实验结果记录、解释错误,2、 造成假阳性结果原因: (1)离心速度过大、时间过长 (2)使用了受到细菌污染的试剂 (3)试验器皿不干净 (4)实验结果记录、解释错误,四、红细胞标本问题,1、患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的红细胞,如骨髓移植患者,或非O型人接受O型红细胞。 2、 某些ABO基因变异的个体或ABO亚型红细胞,一些白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱,应用抗A、抗B试剂未能出现预期的凝集反应。,3、红细胞获得性或遗传性的异常,如获得性B抗原红细胞或Tn/T多凝集红细胞,人血清抗A、抗B试剂可能与这些异
4、常的红细胞反应。 4、使用未洗涤的红细胞标本,其表面黏附的血浆或血清中含针对抗A、抗B试剂中染色剂或其他成分的抗体,出现假阳性反应。,5、患者血清中有高活性、高浓度冷自身抗体严重致敏自身红细胞,以至自发地发生凝集,而不是抗体试剂的特异性免疫反应所致。 6、红细胞表面包被IgG类抗体 7、静脉输入高分子药物如甘露醇、右旋糖酐等,可导致红细胞成緍钱状。,五、血清标本的问题,1、纤维蛋白凝集的红细胞凝块被误认为是血液凝集,如使用血浆标本或未完全去除纤维蛋白的血清标本时出现假阳性。 2、免疫抑制疾病患者血清中ABO抗体减少或消失。老年人ABO抗体减弱。 3、新生儿6个月内婴儿血清中ABO抗体阴性或很弱
5、,一般只测正定不测反定。,4、血清中不正常浓度和比例的蛋白质成分或高分子蛋白增多可引起非特异凝集,如缗钱状红细胞的非特异凝集。 5、血清中含抗A、抗B以外的其他红细胞抗体,如抗M、抗I等。 6、患者接受了ABO血型不同的骨髓移植。,7、患者血清中含有针对红细胞保护剂的抗体。 8、ABO抗体被输入的液体稀释。,结果分析和处理的基本步骤,1、重新采集标本,以避免采集、标记、污染等错误。 2、查询患者临床诊断、既往病史、输血史、用药史、骨髓移植史。 3、彻底洗涤标本或试剂红细胞。 4、应用抗AB、抗A1、或抗H检测红细胞。,5、分析抗筛结果,确定结果是否受同种异型或自身冷抗体干扰。 6、温孵育30
6、min后,离心观察结果,以检测弱的抗原抗体反应。 7、 做自身红细胞做对照,以确定自身抗体的干扰。,ABO正反定不符的分类 一、抗原表达减弱或丢失所致的ABO正反定不符 二、红细胞额外反应所致的ABO正反定不符 三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符,一、抗原表达减弱或丢失 所致的ABO正反定不符,常见的原因: 1、ABO亚型红细胞 2、白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱,应用抗A、抗B试剂未能出现预期的凝集反应 3、急性大出血,处理的方法: 1、将抗A、抗B和抗A,B试剂与洗涤过的红细胞在温或4孵育30min,以增强抗原、抗体的结合。 2、用木瓜酶、菠萝蛋白酶处理红细胞,以
7、增强抗原、抗体的结合。 3、应用抗AB、抗A1、或抗H检测红细胞。,4、用人血清抗A、抗B进行吸收放散试验,检测弱A、B抗原,且同时要做O型血吸收放散试验作对照。,二、红细胞额外反应 所致的ABO正反定不符,常见的原因 1、获得性B红细胞(类B) 2、混合视野凝集(mf) 3、红细胞被致敏,获得性B红细胞的特征,1、常出现在有肠道细菌进入血循环的疾病,也可发生在正常人; 3、常伴有T和Tn多凝集红细胞出现(细菌感染时); 4、自身抗-B不与自身获得性B抗原反应(无自凝现象),获得性B红细胞的鉴定,1、酸化血清抗-B试剂pH至6.0时,检测无凝集,即不与获得性B细胞反应 2、乙酸酐处理能明显减弱
8、其反应,但正常B细胞不受影响 3、临床追踪,感染控制后“类B”现象消失,混合视野凝集,1、非O型人近期输用O型血; 2、骨髓移植后做血型; 3 A3(B3)细胞与抗A(抗-B)呈典型的混合视野凝集现象; 4、双精子受精(嵌合体),红细胞被致敏,1、患HDN婴儿、存在自身免疫或同种异体免疫的成人,其红细胞严重包被IgG抗体分子; 2、与含一定蛋白质浓度的试剂(抗D、抗A、抗B)产生凝集; 3、处理方法:45 放散后,抗体解离,即可准确定型;,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符,常见的原因及处理方法: 1、抗体太弱或消失 如4-6个月幼儿,老年人、免疫抑制患者,应注意患者的年龄和临床诊断
9、2、非正常高浓度的抗A、抗B可引起前带现象,导致假阴性,将血清稀释或用EDTA(2.5)处理可消除;,3、A2、A2B或其他ABO亚型,人血清中可能有抗A1、抗A1只凝集A1型红细胞而不凝集A2、O型红细胞; 4、患者静脉输用了大量大分子药物等原因,可发生类似凝集现象,如缗钱状凝集, 将血清用生理盐水稀释3倍或用盐水替换技术可消除;,5、冷自身抗体 所有试剂及细胞37孵育,37下判读结果; 将冷自身抗体在4吸收在做血型,将血清用0.01mol/L 二硫苏糖醇(DTT)处理完再定型 ;,6、自身免疫性温型抗体 正定被易被误认为AB型,反定易被误认为O型,用递增温度(22,37,45)洗涤红细胞后再做血型鉴定 7、血清蛋白过高 试剂红细胞多呈假凝集,如肝脏疾病、MM等,加盐水稀释后凝集散开,Rh血型,1、导致Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因 (1)直抗(DAT)阳性; (2)标本抗凝不当,受检过程中出现凝血或出现纤维蛋白凝块,误判为阳性; (3)受检细胞与抗血清孵育的时间过长; (4)定型血清中含有事先未被检测的其他特异性抗体,造成假阳性定型结果;,(5)多凝集细胞,造成定型的假阳性,如MM。 (6
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