1、两条多核苷酸链以相同的旋转绕同一个公共轴形成右手双螺旋,螺旋的直径2.0nm
2、两条多核苷酸链是反向平行的,一条5’-3’,另一条3’-5’
3、两条多核苷酸链的糖-磷酸骨架位于双螺旋外侧,碱基平面位于链的内侧
4相邻碱基对之间的轴向距离为0.34nm,每个螺旋的轴距为3.4nm
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1、DNA二级结构的特点？答：（1） DNA分子是由两条互相平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成的（2） DNA分子中的 脱氧核糖和磷酸交替连接，排在外侧，构成基本骨架，碱基排列在内侧。阐述Meselson和Stahl关于DNA半保留复制的证明实验？答：用普通培养基（含14N的氮源）培养N标记的大肠杆菌，经过一代后，所有DNA 的密度都在N-DNA和14N-DNA之间，即形成了一半N和一半14N的杂合分子，两代 后出现等量的14N分子和14N-N杂合分子。若再继续培养，可以看到14N-DNA分子增多， 说明DNA分子复制时均可被分成两个亚单位，分别构成子代分子的一半，这些亚单位 经过很多代
2、复制仍然保持着完整性。描述大肠杆菌DNA聚合酶I在DNA生物合成过程中的作用？答：该酶被认为在切除由紫外线照射而形成的嘧啶二聚体中起着重要的作用，它也可用 以出去冈崎片段5,端RNA引物，使冈崎片段间缺口消失，保证连接酶将片段连接起来。DNA的损伤原因是什么？答：DNA的损伤分自发性损伤、物理因素引起的DNA损伤、和化学因素引起的DNA损伤。 自发性损伤是由于DNA复制中的错误和碱基的自发性化学变化造成DNA的损伤。物理因 素引起的DNA损伤常是缘于紫外线引起的DNA损伤和电离辐射引起的DNA损伤。化学因 素引起的DNA损伤是突变剂或致癌剂对DNA的作用，包括烷化剂对DNA的损伤和碱基类 似物
3、对DNA的损伤。组蛋白具有哪些特性？答：进化上的极端保守性，无组织特异性，肽链上氨基酸分布的不对称性，组蛋白的修 饰作用（包括甲基化，乙酰化，磷酸化，范素化及ADP核糖基化），富含赖氨酸的组蛋 白H5比较原核生物和真核生物DNA复制的不同点。答：真核生物每条染色质上可以有多处复制起始点，而原核生物只有一个起始点；真核 生物的染色体在全部完成复制之前，个个起始点上DNA的复制不能再开始，而在快速 生长的原核生物中，复制起始点上可以连续开始新的DNA复制，表现为虽只有一个复 制单元，但可有多个复制叉（1）原核为单复制起点，真核为多复制起点（2）原核 复制子大而少，真核复制子小而多（3）真核复制起始
4、受许可 因子的控制（4）真核复制叉移动的速度快，原核速度慢（5）真核冈崎片段小,原核大（6）真核复制存在端粒和端粒酶（7）真核原核DNA聚合酶种类,结构，作用上有差异（8）真核生物DNA复制的起始需要起始原点识别复合物（ORC）参与大肠杆菌染色体的分子质量大约是2.5x109Da，核昔酸的平均分子质量是330Da，两个 邻近核昔酸对之间的距离是0.34mn，双螺旋每一转的高度（即螺距）是3.4nm，请问（1） 该分子有多长？（2）该DNA有多少转？1）该分子有多长？答：1碱基=330Da，1碱基对=660Da碱基对=2.5X109/660=3.8X106 kb染 色体 DNA 的长度=3.8X
5、 106/0.34=1.3 X 106nm=1.3mm（2）该DNA有多少转？答：转数=3.8X106X0.343.4=3.8X105转座作用机理及遗传学效应？答：作用机理：转座可被分为复制型和非复制型两大类。顾名思义，在复制性转座中， 整个转座子被复制了，所移动和转座的的仅仅是原转座子的拷贝。转座酶和解离酶分别 作用于原始转座子和复制转座子。TnA类转座主要是这种形式。与此相对应，在非复制 型转座中，原始转座子作为一个可移动的实体直接被移动，IS,Mu及Tn5等都以这种方 式进行转座。遗传效应：转座引入插入突变（P65） 转座引起新的基因转座产生的染色体畸变转座引起的生物进化请解释与DNA复
6、制有关的两个术语：进行性和忠实性。在E。coil DNA复制过程中，哪 些蛋白质或酶能够增强DNA复制的进行型和忠实性？答：进行性是指DNA聚合酶沿着DNA模板所能移动的更大距离，即合成DNA分子 的长度。DNA聚合酶III的B钳确保DNA复制的进行性。忠实性是衡量DNA聚合酶合成子代DNA分子的准确度，DNA聚合酶I的3, 一5,核酸外切 酶校正功能确保DNA复制的忠实性。11、试述DNA复制过程，DNA复制的基本规律。以E。 coli为例,DNA复制过程分三个阶段；起始：从DNA上控制复制起始的 序列即起始点开始复制，形成复制叉，复制方向多为双向,也可以是单向，若以双向进 行复制，两个
7、方向的复制速度不一定相同。由于DNA聚合酶不能从无到有合成新链, 所以DNA复制需要有含3 -OH的引物，引物由含有引物酶的引发体合成一段含3 一 10个核苷酸的RNA片段；延长：DNA复制时，分别以两条亲代DNA链为模板，当复 制叉沿DNA移动时，以亲代3-5链为模板时，子链的合成方向是5-3、可连续 进行，以亲代5-3链为模板时，子链不能以3-5方向合成，而是先合成出许 多5-3方向的冈崎片段，然后连接起来形成一条子链；终止：当一个冈崎片 段的3-OH与前一个冈崎片段的5-磷酸接近时，复制停止，由DNA聚合酶I切除引 物，填补空隙，连接酶连接相邻的DNA片段。DNA复制时，由DNA解旋酶（
8、又称解链酶）通过水解ATP获得能量来解开DNA双链，并 沿复制叉方向移动,所产生的单链很快被单链结合蛋白所覆盖，防止DNA的变性并保 护其单链不被降解，复制叉前进过程中,双螺旋产生的应力在拓扑异构酶的作用下得 到调整。DNA复制基本规律：复制过程为半保留方式；原核生物单点起始真核生物多点 起始，复制方向多为双向，也有单向；复制方式呈多样性，（直线型、Q型、滚动环 型等）；新链合成需要引物，引物RNA长度一般为几个10个核苷酸，新链合成 方向5-3、与模板链反向，碱基互补；复制为半不连续的，以解决复制过程中， 两条不同极性的链同时延伸问题，即一条链可按5 3方向连续合成称为前导 链，另一条链先按
9、5 3方向合成许多不连续的冈崎片段（原核生物一般长 1000-2000个核苷酸，真核生物一般长100-200个核苷酸），再通过连接酶连接成完 整链，称后随链，且前导链与后随链合成速度不完全一致，前者快，后者慢。第八章简述DNA的甲基化修饰有哪些生理意义？答：DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。DNA 甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变， 从而控制基因表达。简述翻译后水平的调控及其加工是如何进行的？答：真核翻译后水平的调控有哪些（1）翻译后产生的多数蛋白质无生物活性，必须经过 切割加工、水解、化学修饰、剪接；（2
10、）某些蛋白质有选择的受到抑制；（3）某些蛋白质 必须位于细胞内特定位置，如溶酶体、线粒体、叶绿体；（4）需同其他蛋白质结合，组装 成功能单位，如血红蛋白、微管蛋白、核糖体等，都是由多条蛋白质分子结合在一起形成的 功能单位真核生物转录后水平的调控机制？答：真核细胞中，存在着普遍的转录阻遏机制，与基因的激活相拮抗。阻遏蛋白参与的作 用机制可分为3种：竞争性DNA结合机制、猝灭或遮盖机制及直接作用于通用转录机构 的作用机制竞争性DNA结合机制阻遏蛋白结合于基因上游调控的特定序列，阻止了紧邻 的DNA序列与活化蛋白的结合，从而使该基因不能转录试诉真核生物基因表达调控的一般规律？答：真核基因组比原核
11、大得多，结构更复杂，含有许多重复序列，基因组的大部分序列不 是为蛋白质编码的，而为蛋白质编码的基因绝大多数是不连续的。真核生物基本上是采取逐 个基因调控表达的形式。真核基因表达调控的环节更多，转录前可以有基因的扩增或重排， 并涉及染色质结构的改变、基因激活过程。转录后调控的方式也很多，但仍以转录起始调控 为主。正性调控是真核基因调控的主导方面，RNA聚合酶的转录活性依赖于基本转录因子， 在转录前先形成转录复合体，其转录效率受许多蛋白因子的影响，协调表达更为复杂。比较原核生物与真核生物基因表达调控的异同点？答：原核基因表达调控特点：RNA聚合酶只有一种，其a因子决定RNA聚合酶识别特异 性；操纵
12、子模型的普遍性；阻遏蛋白与阻遏机制的普遍性（负性调节占主导）；转录 和翻译偶联进行；转录后修饰、加工过程简单；转录起始是基因表达调控的关键环节 真核基因表达调控特点:RNA聚合酶有三种，分别负责三种RNA转录，每种RNA聚合酶由约 10个亚基组成；活性染色质结构发生变化；正性调节占主导；转录和翻译分隔进行； 转录后修饰、加工过程较复杂；转录起始是基因表达调控的关键环节真核生物转录水平的调控机制？ P302答：真核生物真核基因表达在转录水平的调控机制极为复杂。据估计，真核细胞的基因大约 有十分之一是用以编码参与转录调控尤其是转录起始调控的蛋白质的。目前，这方面的研究 主要集中于通用转录因子在TA
、TA盒上的组装与去组装以及基因特异性激活蛋白对转录 的正调控作用两个方面，而对转录的负调控作用尚未予以足够重视。这是由于较晚才发现真 核基因表达调控中存在阻遏蛋白，对它的认识尚需一个不断深化的过程，同时也有观点上的 束缚：认为既然在真核细胞中通常只有大约7%的基因能被转录，而其它的基因与组蛋白等 结合为染色质而受到阻遏，所以经济的调控手段应为激活而非阻遏。但在真核细胞中，确实 存在着普遍的转录阻遏机制，与基因的激活相拮抗。阻遏蛋白参与的作用机制可分为3种： 竞争性DNA结合机制、猝灭或遮盖机制及直接作用于通用转录机构的作用机制竞争性DN A结合机制阻遏蛋白结合于基因上游调控的特定序列，阻止
14、了紧邻的DNA序列与活化蛋 白的结合，从而使该基因不能转录。真核基因表达调控的过程？ P3011、经过测序分析，欲克隆的一段DNA序列如下：GAATTCCGGCGGCGGGGTTTTCATTATTATGATCGTTGACATGGGACAAGGGG（1）CTCCTATAATAGGTGCATTTGTAGGGGATGTGGCCACATGATAGCGCGTCGAG GCATTCAGGACCGATATTGTCATATTGCCAGCATGCTGCAGCGCGCCAACTTAG TTACAACTTATACGATGATTTTAAAAAAAGAATATCAAATAGCCATCCACCCGA AAGACCACCG
、CAAGTATCGGTACGATCGTACCAGCACACACCACAGTCGCCA GTCTGTTACCAAATAATAAAGTTGATAATTAATTCACATCTACCTGGGTAACCC AGGTAGATGTGAATTTTTAGAATTC 这段序列被一种限制性内切酶酶切后，可插入到某多拷贝质粒中，并表达了一个小肽。请 说出图中下划线标出的序列是哪些功能位点和调控序列？对调控序列，请简单说明其在基 因表达中的功能。一段从 E。col中分离出来的 DNA 单链序列为：5-GTAGCCTACCCATAGG-3 （1）DNAg制 时，另一条单链的序列；（2）设mRNA是由这段DNA单链的互补
16、链作为模板转录而来， mRNA的序列怎样？（3）如果转译从mRNA的5端开始，将得到什么样的多肽（设并不需要 起始密码子）？当tRNAAla离开核糖体后，核糖体将结合什么样的tRNA？当Ala的氨基形成 肽键后，如果有化学键断裂，是什么键? tRNAAla又将怎样？（4）这个RNA可编码多少种不同 的肽？如果以另一条DNA单链作为模板，还会得到相同的肽吗？ （5）设这条DNA链像（2） 中所说的那样被转录，但不知道用哪个可读框。请判断这个DNA是来自一个基因的正规？ 中部？还是尾部？答：（1）5 -CCTATGGGTAGGCTAC- 3（2）5 -GUAGCCUACCCAUAGG- 3（3
、）如果从RNA的5段开始翻译，合成出来的蛋白质应为Val-Ala-Tyr-Pro（VAYP）。只有 在Ala和Tyr见的肽键形成后，tRNAAla才会离开核糖体。这样，在tRNAAla离开后，与 核糖体结合的下一个tRNA为tRNAPro。当Ala的氨基形成肽键，Val和tRNAVal间的酯键 就会断裂，tRNAVal离开核糖体，同时tRNAAla从A位移到P位。（4）因为有3种不同的可读框，所以这个段RNA可编码3个不同的肽。在第二个读码框， 个密码子是终止密码子UAG，但是，随后的密码子不可被翻译。（5）由于没有AUG甚至仔鹏，这个序列不可能来自一个基因编码的起始部分。如果用第 一个
、或第二个可读框，它可能来自基因的末端；如果用个可读框，它可能来自基因的 中部。2大肠杆菌在含有葡萄糖的培养基中长势良好，当将其接种到只含有乳糖的培养基上时，起 初大肠杆菌的长势很弱，但接种几代之后该菌株又恢复其良好长势。请运用相关知识解释 这一现象。这是基因的可诱导调节。所谓的可诱导调节是指一些基因在特殊的代谢化合物的作用下， 由原来的关闭状态转变为工作状态，即在某些物质的诱导下使基因活化。例如，在只有乳 糖培养基中，E。 coli开始生长不好，直到合成了利用乳糖的一系列酶，具备了利用乳糖作 为碳源的能力，E。 coli才能在这一培养基中生存下来，E。 coli获得这一能力的原因就是 因为
、在诱导物乳糖的诱导下，开动了乳糖操纵子基因，表达了它编码的酶：8-半乳糖昔酶， 这一类基因称为可诱导基因，这类酶称为诱导酶下图为人类基因的各部分结构，请结合所学知识写出图中A-O字母所代表的具体内容。K 。 J。 I 。 H。L 。 M。 N 。 0茵 l1l1潭 1EG。 F.11 r： i1 jf 11D。C 。A。E答：A：转录域B：下游域C：上游域D：模板链（或反义链、非编码链）E：有意链（或编码链）F：外显子G：内含子H： ATG I：起始点J：启动子（TATA盒）K：上游增强子L： TAAM：多聚A位点N：终止点 0：下游增强子3、 现分离了一段DNA，含有编码多肽的基因的前
20、几个密码子，该片段的序列组成如下： 5 -CGCAGGATCAGTCGATG TCCTGTG-3 3 -GCGTCCTAGTCAGCTACAGGACAC-5 回答以下问 题并作说明。1）哪一条链为反义链？哪一条链为有意链？2）mRNA的顺序是什么？并请标出第二个密码子的位置。3）此mRNA能形成二级结构吗？若能，请写出此结构。4）翻译从哪里开始？朝哪个方向进行？5）此DNA更可能是从原核细胞还是真核细胞中分离的？为什么？定有一种大肠杆菌，其甲硫氨酸操纵元只由衰减子机制调控而没有阻遏蛋白。在 这种操纵元模型中，甲硫氨酸衰减子同大肠杆菌的色氨酸衰减子机制十分类似，在mRNA链 上衰减子的部分序列
21、如下：5 -AAAAUGAUGAUGAUGAUGAUGAUGAUGGACUAA- 3翻译的起点位于这一序列的上游，且给出的序列是一正确的阅读框。当mRNA发生下列 情况的突变时，大肠杆菌的甲硫氨酸操纵元的表达情况如何（组成型、野生型、或MetD ？ 并请说明原因。（1）斜体的A缺失；（2）斜体A及带下划线的A都缺失；（3）序列中的前三个A都 缺失。答：（1）组成型表达UGA:因为斜体A缺失后会引起移框突变，由原来的AUG AUG，等等 变为UGA UGA等等。UGA是终止密码子，所以衰减子不能继续翻译，结构基因可继续转录。（2）Met-：当斜体A及带下划线的A都缺失后，同样会引起移框突变，由原
22、来的AUG AUG， 等等变为GAU GAU，等等，GAU是天冬氨酸密码子，这样，即使在培养基中甲硫氨酸的含 量很低，衰减子序列的翻译也会继续下去，操纵元的结构基因的转录就会终止。（3）野生型：当前三个A都缺失时，阅读框并不会发生改变。注：AAA： Lys （赖氨酸）；GAU： Arp （天冬氨酸）1）你打算扩增下图所示的两段序列之间的DNA，请在下列序列中选择合适的两条作为上、 下游引物。5-GACCTGTGGAAGCCATACGGGATTG- 33 -CTGGACACCTTCG-GTATGCCCTAAC- 5可供选择的序列：5 -CTGGACACCTTCG5-CATACGGGATTG5 -
23、GACCTGTGGAAGC5-GTATGCCCTAAC5-CGAAGGTGTCCAG5-CTTACCCGATAG5-GCTTCCACAGGTC5-CAATCCCGTATG2）某一质粒载体具有Tetr和Ampr的表型，在Tet抗性基因内有一BamH I的切点。现用BamHl 切割该载体进行基因克隆，问：转化后涂皿时应加什么样的抗生素？培养后长出的菌 落具有什么样的抗性基因型？如何利用抗性变化选到含有插入片段的重组体？答：1）5 -GACCTGTGGAAGC 上游引物；5 -CAATCCCGTATG 下游引物。2）加氨苄青霉素；Tetr Ampr； Tets Ampr；选择只能在氨苄青霉素平板上
24、生 长，而不能在四环素平板上生长的菌落。实验对一原核生物基因转录实验验证该基因转录的终止为不依赖于p因子的方 式进行。进而扩增获得该基因核酸片段，并测出的其DNA序列，通过对序列分析得 到以下几个特征序列和位点，（1）请写出各特征位点名称，并写出该位点功能和 作用。（2）写出转录的mRNA序列，并指出SD序列，翻译起始密码子，翻译终止 密码子。（3）写出翻译得到的蛋白质一级结构，用三个字母表示氨基酸。5PGGGGTTTTGATTATTATGATGGTTGAGATGGGAGAAGGGGGTGCTATAAT|AGGTG 词TTTGAAAGATGAGGATTAGGGATGTGGGCAGATG 23
25、MAGCGGGTCGAGGCATTGGAGCTGAGAGGCCTTTTTTGAATTCTACTGTAGT3有关氨基酸的简并密码分别为, Val: GUU gUCJGUA GUCys: UGU UGCj t jj小别为Arg: CGU菌-多肽基以及它编Cgc cga cAGAJagg GCA CGCP 列是：Ala: GC编GGU5gacaAtgtatggt因感的序列？ b。AGT该基因的无果利用PCR剧该基因，需要合段引物的序列？（2）已知一种突变将正常的蛋白质和突变体蛋白质用胰蛋白酶消化后，进行指纹图分析。结果发现只有一个 肽段的差异，测得其基酸顺序如下：正常肽段Met-Val-Cys
26、-Val-Arg；突变体肽段 Met-Ala-Met- Arg。a。什么核昔酸插入到什么地方导致了氨基酸顺序的改变？ b。推导出 编码正常肽段和突变体肽段的核昔酸序列。答：（1） a。某一基因的编码链的碱基序列与其mRNA序列是一样的，只不过U代替了 T。因此该基因编码的 mRNA 序列是：5, -ACAAUGUAUGGUAGUUCAUUAUCCCGGGCGCAAAUAACAAACCCGGGUUUC-37无意链与编码链互补：5, -GAAACCCGGGTTTGTTATTTGCGCCC GGGATAATG AACTACCAATACATTGT-3、 ； b。 9 肽，mRNA 所含的 ORF 序列
27、是： AUGGUAGUUCAGTTC- Rna以下问题并作简要 少个,它能核苷个核昔酸插入a。。c。如 请写出此两 &码突变的，UCAGUUUUCUUAUUGUEheTyrCysUUCUCCUACUGCUSerUUAUCAUAAUGA StopLeuStopUUGUCGUAGUGG T娘CUUOCUCAUCGUHisCUCCCCCACCGCCLeuProAigCUAC5CACAACGAGinCUGCCGCAGCGGAUUACUAAUAGUAs itSerAUCAlie ACCAACAGCAlliiAUAACAAAATAGALvsAigAUGMt ACGAAGAGGUUAUCCCGGGCGCAA
28、AUAA； c。引物序列只要将ORF包括在内即可，GC含量次之。如分别是5 -ACAATGTATG-3和 5 -GAAACCCGGG-3a。在正常肽段的个Val的密码GUA的G后插入了一个C； b。正常肽段的核苷酸 序列为：AUG GUA UGC GUCG；突变体肽段的核昔酸序列为：AUG GCU AUG CGU。大肠杆菌某一多肽基因的编码链的序列是：5ACAATGTATGGTAGTTCATTATCCCGGGCGCAAATAACAAACCCGGGTTTC3(1)写出该基因的无意义链的序列以及它编码的mRNA的序列。(2 )起始密码子和终止密码子是什么？在序列中划出。预测它能编码多少个氨基酸
29、？ ORF序列？标出该基因上对紫外线高敏感位点。近年来，我国农业生物技术发展迅速，实现了将抗菌肽基因导入棉花植株中，获得了转基 因植株，经过推广种植，对棉铃虫的抵抗力明显增强，大大提高了棉花的产量。现欲将另 一杀虫基因转入经济作物烟草中，提高其抗能力，请设计实验思。要求：实验思的 描述基本完整，必须包括载体构建、转基因操作、转基因植株的选、阳性植株的抗感染 能力鉴定、遗传稳定性考察等5部分。尽管DNA聚合酶催化聚合反应既需要模板，又需要引物。但下面的单链DNA却可以直接作 为DNA聚合酶I的有效的底物。试解释其中的原因，并写出由DNA聚合酶I催化而形成的 终产物的结构。SH-TGGCT
30、CATAGCCGGAGCCCTAACCGTAGACCACGAATAGCATTAGGpS5由于此链DNA特殊的碱基组成使得该DNA能够形成如图所示的茎环结构IXA T ACTCGGT- 0H3,G。 GAGCCCTAACCGTAGACCACGAATAGCATTAGGp 5、C C G，DNA聚合酶I能以该结构的3-OH为引物，以5-端的序列为模板催化聚合反应的进行，但 对于DNA聚合酶I来讲，在催化聚合反应之前，会通过其35的外切酶活性将末端错配的 T水解掉而引入正确的G，然后再进行延伸反应，更终得到的产物是T - A- cILGGGATKjGCATCTOGT GCTIATC-G1AATCC-
31、QH37 %、/ GAGCC CTAACCGTAGACCACGAAIAGC AHAGGp 53一个基因如何产生两种不同类型的mRNA分子？一个基因可以有两种方式产生一种以上的mRNA。种是：一个原初转录物含有 一个以上的多腺昔化位点，就能产生一种以上的具有不同3末端的mRNA。第二种方式是： 如果一个原初转录物含有几个外显子，那么，会发生不同的剪接，就会产生多种mRNA。有一个被认为是mRNA的核昔酸序列，长300个碱基，你怎样才能：(1)证明此RNA是mRNA 而不是tRNA或rRNAo(2)确定它是真核还是原核mRNA。(1)此序列太长不可能是tRNA。如果它是rRNA，应该含有许多特
32、殊元件，如：尿嘧啶 和5甲基胞嘧啶；同时应具有可以形成发夹环的反向重复序列。如果是mRNA则应有AUG 起始密码子、一段相应的氨基酸密码子和一个相应的终止密码子构成的可读框。(2 )所有 的真核生物mRNA在5端都含有一个7一甲基鸟昔，而且大多数还在3端有一个长的 polyA尾巴。这些都是原核生物mRNA所不具有的，但是原核生物mRNA靠近5端有l个核 糖体结合序列（SD序列）。一种野生型E。coli菌株的一种蛋白质的108位为Val残基，分离出三种突变体（A、B和C） 发现它们在这个位置分别是Gly、Glu和Leu。A和B的突变株中这个位置上的氨基酸 分别是Trp和Lys，突变C没有做
33、进一步的实验。（1）解释上述结果并推测6种菌株中该 位置上的密码。（2）A，B和C中哪两个菌株的杂交将会由于108位密码内的交换而产生野 生型重组体？（1）唯一的可能是：野生型突变型突变A。甘氨廖（GGG 色氨酸（UGG）皴氨酸 一 B。谷氨酸（GAG） 赖氨酸（AAG）1 GUG ）C。亮氨酸（UUG 或 CUG ）2）编码GAG和UUG （菌株A和C）或编码GGC和UUG （菌株B和C）密码子的DNA分子之间 的重组将会产生一种编码野生型密码子GUG的DNA分子试写出一个基因可产生不同的表达产物的所有可能机制使用不同的启动子进行转录；前体mRNA的选择性加工；前体mRNA的选择性加尾；
34、mRNA编 辑；翻译后水平的选择性加工。用BamHI切割一重组质粒DNA分子并从中分离纯化了两个DNA片段，一段长bp，另一 段长900bp。现在希望将这两个片段重新连接起来，得到图所示的结果。HIBam HIBam HII 900 300 | 300 f 700 EmR I剧口R I于是将这两种片段混合起来，并在连接酶的存在下进行温育，分别在30min和8h取样进行 凝胶电泳分析。令人惊讶的是，连接产物并非是理想中的1.3kb的重组分子，而是一种复 杂的片段模式如下图（a）。同时发现随着温育时间的延长，较小片段的浓度逐渐降低，大 片段的浓度逐渐增加。如果用Bam H I来切割连
35、接后的混合物，则起始的片段可以重新产 生如下图（a）。从凝胶中分离纯化出1.3kb的片段，并取出一部分用Bam H I进行切割，以检查它的结构。 正如预料的一样，出现了两个原始的带如下图（b）。但是用EcoRI切割另一部分样品， 希望能够产生两个300bp和一个长度为700bp的核苷酸片段。然而，凝胶电泳的结果，令 人惊奇如下图（b）。-500-300-200开始的片段；连接了 30min J度接了 8h；4重新用及州H I切割姓化的1.3场片段;2用琢用H I切割；3用EmRI切割（1）在原始连接混合物中为什么有如此多的带？（2）为什么用Eco R I切割纯化的1.3kb连接物会产生那么多的
36、片段？（1）由于任意两个BamHI位点都可以连接在一起，产生的连接产物就很复杂。因此，0.4kb 的片段连接在一起可以产生如0.8、、1.6、2.0kb等一系列的片段。同样，0.9kb的片 段也可以产生1.3、1.7、2.1和kb等片段。（实际情况更复杂，因为片段自身可以首 尾连接成环。）（2）由于任意两个Bam H I末端可以连接，甚至同一大小的片段也有几种不同的结构（下 图中的1.3kb片段），所以用Eco R I来切割1.3kb片段的群体，可以产生各种不同大小 的片段，范围可以从0.1kb （下图中结构3和4的左端）到1.0kb （下图结构4中的内部片 段）。R1R001
37、00200700R1R00100700200R1R0300200700R1R0300700200为了绘制长为3.0kb BamHI限制性片段的限制性图谱，分别用EcoR I、HpaII、EcoRI+Hpa II消化这一片段的三个样品，然后通过凝胶电泳分离DNA片段，漠化乙锭染色后观察DNA 带型(见下图)。EcdR-l+EmR i Hpa n Hpa n1.7kbl。Skb1.4kbkb0.9kb0.9kb0.4kb0.5kb0.4kb请根据这些结果绘制一个限制性图谱，要标明Eco R I和Hpa II识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离(kb)。Bqtu HI Ec
38、qR.1Hpa II EcoR.1Bam HII0.4| 0.5 I0.9 I1.611.4下图是Bam HI片段的限制性图谱。倒装法绘图是同样有效的，制作这种图谱的一 种方法是：画一条适当长度的线段表示3.0kb的BamH I片段。由于Hpa II只切 割一次，HpaII的位点可以明确的定位，从片段的任意一端起1.6kb处标出其位置。 Eco R I切割片段两次，如果你从片段的任意一端起1.7kb处确定Eco R I位点的 位置，你会发现它与Hpa II的距离同那些用双酶消化所得到片段的大小不相符。 因此1.7kb的片段必定位于中间，两个Eco RI位点必定离两端各为0.4和0.9kb。真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PC
DNA
二级结构是指
DNA
分子在空间中的排列方式。
DNA
分子在二级结
构中呈现出双螺旋结构，具有以下几个特点：
双螺旋结构：
DNA
的二级结构是由两条互补链以螺旋的形式缠绕在
一起构成的。这种螺旋结构通常被称为
B
型
DNA
。两条链以反平行方式排
列，即一个链的
5'
末端与另一个链的
3'
末端相对应，两条链之间通过碱
基对相互连接。
碱基对结合：
DNA
的二级结构中，腺嘌呤（
A
）与胸腺嘧啶（
T
）之
间形成两个氢键，而鸟嘌呤（
G
）与胞嘧啶（
C
）之间形成三个氢键。这种
碱基对结合方式使得
DNA
分子具有高度的稳定性。
遵循基因座原则：
DNA
的二级结构中，一个碱基对位点被称为一个
基因座。基因座的长度可由几个碱基对组成。每个个体的
DNA
在基因座位
点上的碱基对组合都是唯一的，这是基因多样性的基础。
4、
螺旋周期和倾角：
DNA
的二级结构中，双螺旋的周期是由两条链之
间碱基对的数目决定的，通常为
10
个碱基对。此外，
DNA
的双螺旋结构
是右旋的，即链的旋转方向是顺时针的，倾角约为
36
度。
5、
平行排列的螺旋：
DNA
的二级结构中，两条链是平行排列的，互相
绕着同一个中心轴旋转。这种排列方式使得
DNA
分子具有双螺旋的对称性。
6、
氢键的稳定性：
DNA
的二级结构中，氢键起着稳定分子结构的重要
作用。氢键是通过电荷分布不均匀而形成的，使得碱基之间的结合更加牢
固。
dna
二级结构的特点
、为右手双螺旋，两条链以反平行方式排列；
2
、两条由磷酸和
脱氧核糖形成的主链骨架位于螺旋外侧，碱基位于内侧；
3
、两条链间
存在碱基互补，通过氢键连系，且
A=T
、G≡C；
4
、碱基平面与螺旋纵
轴接近垂直，糖环平面接近平行；
、螺旋的螺距
3.4nm
，直径为
2nm
，相邻两个碱基对之间的垂直距离为
0.34nm
，每圈螺旋包含
10
个碱基对。
DNA
的二级结构是指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺
旋结构。两条多核苷酸链以相同的旋转绕同一个公共轴形成右手双螺
旋，螺旋的直径
2.0nm
；两条多核苷酸链是反向平行的，一条
5’
-3
方向，另一条
3’
-
5’方向；两条多核苷酸链的糖
-
磷酸骨架位于双螺
旋外侧，碱基平面位于链的内侧；相邻碱基对之间的轴向距离为
0.34nm
，每个螺旋的轴距为
3.4nm
DNA
二级结构的稳定作用力有两条多核苷酸链间的互补碱基对之
间的氢键；碱基对疏水的芳香环堆积所产生的疏水作用力，以及堆积
的碱基对间的范德华力；磷酸基团上的负电荷与介质中的阳离子化合
物之间形成的盐键。
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2023-12-01
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