一、外周血dna的提取与鉴定实验报告

人类外周血

DNA

提取

实验四人类基因组

DNA

提取

【目的】

掌握人基因组

DNA

的抽提方法。

从不同组织细胞或血细胞中提取高质量的

DNA

是进行基因诊断的

先决条件。基因组

DNA

可以从任何有核细胞中提出，人外周血中的淋

巴细胞是抽提基因组

DNA

更方便的材料。由于

DNA

在细胞核内是与

蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取过程中必须将其中的蛋白

质除去，

SDS

可将细胞膜、核膜破坏，并将组蛋白从

DNA

分子上分

离，使核蛋白上的核酸游离。

EDTA

可抑制细胞中

DNase

活性。蛋白

酶

K

可以用于消化细胞核膜以及核内蛋白质，

RNase

除去核酸中的

RNA

。再用苯酚氯仿抽提可进一步使蛋白质变性而与核酸分开，再经

无水乙醇沉淀，更后可得到比较纯净的

DNA

【试剂】

外周血基因组

DNA

提取试剂盒

【操作步骤】

取

200ul

新鲜、加入抗凝剂的血液。

加入

20ul

蛋白酶

K

（

20mg/ml

），混匀。

加入

200ul

缓冲液

GB

，充分颠倒混匀，

70

度放置

10

分

钟，溶液应变清亮，简短离心以除去管盖内壁的水珠。

4、

加

200ul

无水乙醇，充分振荡混匀

秒，此时可能会出

现絮状沉淀，简短离心以除去管盖内壁的水珠。

5、

将上一步所得的絮状沉淀都加入一个吸附柱

CB3

中（吸

附柱放入收集管），

12000rpm

离心

30

秒，倒掉废液，吸附柱

CB3

放回收集管中。

6、

向吸附柱

CB3

中加入

500ul

去蛋白液

GD

，

12000rpm

离

心

30

秒，倒掉废液，吸附柱

CB3

放回收集管中。

7、

向吸附柱

CB3

中加入

700ul

漂洗液

PW

，

12000rpm

离心

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