用PCR产物分析检测亲子鉴定的方法
作者:安康鉴定 发布时间: 人气:492
本鉴定所实验用PCR产物分析检测亲子鉴定方法主要有:
(一)直接凝胶电泳:检测有否扩增产物和检测片段大小;
(二)点杂交或夹缝杂交(ASO-PCR):根据与目的片段序列互补的寡苷酸探针杂交,检测扩增片段之间的序列差异;
(三)酶切分析(PCR-RFLP):根据PCR扩增片段是否存在限制内切酶酶切点及位置不同,用内切酶酶切PCR产物,然后电泳分离检测酶切产物;
(四)PCR-ELISA:修饰一个引物5‘使其带有便于PCR产物固定的功能团,而通过修饰另一引物端5‘使具有便于酶联显色检测的功能基团,达到酶联显色;
(五)多色荧光分析法:用不同荧光颜料标记不同引物的5’端,PCR扩增产物因带有不同的染料呈现不同的荧光颜色,根据颜色分开来;
(六)PCR-HPLC(高压液想析)法:PCR产物通过HPLC仪自动分析,7~8min即可显示结果,灵敏度为0.3ng。
(七)毛细管电泳:检测有否扩增产物和片段大小。
做亲子鉴定的前提关键就是提供一份合格的检测样本,只要是人体任何有细胞均可以拿来做亲子鉴定,样本是合格的准确率均为一致。
DNA亲子鉴定的原理及步骤是什么?每个人的DNA遗传物质都是一半来自母亲,一半来自父亲;因此孩子的一对等位基因也就是一个来自母亲,一个来自父亲。如果对多对等位基因进行检测,鉴定结果如果全部符合这一规律,则表明具有生物学意义上的亲子关系;若不符合这一规律,则排除亲生关系(变异情况除外)。在大多数的情况下,母、子关系是已知的,要求鉴定设父和孩子是否具有亲生关系。此时只要对比孩子与设父的基因型,如果每一对等位基因中孩子与设父都出现相同的基因型,则可以认定具有亲子关系。如果等位基因中孩子与设父出现两对或两对以上的不匹配的基因型,则可排除设父与孩子的亲生关系。通常通过对、对甚至更多对这样的STR基因位点检测,可以达到认定是否具有生物学意义上的亲子关系。
DNA亲子鉴定目前在社会上已经是一项很成熟的技术了,DNA亲子鉴定是目前更准确的亲权鉴定方法,在单亲的DNA亲子鉴定中,如果小孩的遗传位点和被测试男子的位点有3个以上包括3个的基因位点不一致,那么该男子便100%被排除血缘关系之外,即他绝对不可能是孩子的父亲。如果孩子与其父母亲的位点都吻合,我们就能得出亲权关系大于99.99%的可能性,即证明他们之间的血缘亲子关系 如果出现两个或一个基因位点不一致的话,就可能出现了百分之1.4基因突变的情况,那时就需要补充母亲的样本再进行验证了。
一、DNA亲子鉴定的原理
通俗地讲,一个个体的DNA从父母处获得,而且也只能从父母处获得,其中父母的机会均等,父亲将自己的DNA奉献给孩子一半,母亲也给了一半,孩子各带有父母一半的DNA,孩子不可能带有父母没有的DNA,这是基本的遗传规律。
DNA鉴定就是根据这种遗传规律,对父亲、母亲、孩子的DNA进行检测,如果发现孩子带有父亲或者母亲没有的DNA,则可以排除亲子关系,如果经检测孩子确实带有一半父亲、一半母亲的DNA,然后再进行一些统计学方面的计算,以排除大规模人群中非父母子关系偶然出现的DNA一致的情况,更终确定父母子关系。
二、DNA亲子鉴定的步骤
这里我们选择毛细管电泳仪和荧光标记试剂盒检测进行介绍。从获得样本以后开始,常规样本的检测步骤如下:
步:DNA提取
就是把样本细胞中所含有的DNA提取出来,然后进行一定的纯化,去除样本中的杂质。
第二步:PCR扩增
PCR的中文名为聚合酶链式反应,简单的说,PCR扩增这一步就是把我们所需要的片段通过酶促反应,放大到通过某些专用仪器可以看到的程度。
步:后PCR反应
这一步主要是上测序仪检测的准备阶段,将双链的DNA打开,加一些检测用的的内标,主要是用来标记检测的片段长度。
第四步:毛细管测序仪检测
由于DNA带有电荷,通过毛细管电泳的方法,不同片段DNA长度的电泳速度不同,在同样的电压,同样的电泳时间下,泳动的距离不同,这些长短不同的距离可以通过前期加入的内标测量分辨出来,同时可通过一定的软件显示在电脑上,方便检测人员处理和分析数据。
第五步:分析数据,出具报告
主要是检测人员将所得结果进行分析汇总、计算,然后出鉴定和报告。
DNA鉴定中心鉴定所的专家告诉我们,上面的步骤为常规样本(血液、血痕、口腔拭子、带毛囊的毛发)的常规检测步骤,不包含一些特殊样本的前期处理。比如骨骼、牙齿、精斑、混合斑等样本,还需要一个复杂的前期处理过程,有的还需要二次消化,比常规检测的步骤要多很多,而且操作相对精细和麻烦。
亲子鉴定的经典步骤如下:
(步骤1)从血液、口腔黏膜等载体上提取细胞,通过物理或化学方法破坏细胞膜和膜,释放细胞内的DNA;
(步骤2)使用试剂盒,通过pCR技术将微量的DNA通过反应后变成能达到检测需要的量;
(步骤3)将样本放入遗传测序仪,通过电泳检测,得到分析结果;
(步骤4)检测人员对检测结果进行评估和统计学计算,得出更终。
个人亲子鉴定纱布血(血痕、血斑)的采集方法:
清洁双手,酒精(不要用碘伏)消毒采血部位,用一次性采血针快速取指尖血或耳垂血,较小宝宝可用足底血,挤出3-5滴米粒大小,用单头医用棉签(3根)或干净纸巾擦拭,也可将收集卡轻放在血液上方(注意不同位置),将样本放置内自然阴干,然后分别放入纸质信封中(不要用塑料袋,避免密封后起潮霉变),并作好相应标记(如:采集日期,样本名称:父亲、母亲、小孩及)。
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