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亲子鉴定是学STR分型检测方法在生活中的应用。STR-(short tandem repeat,短片段重复序列)广泛存在于人类及哺乳动物的基因组中,具有高度多态性,它们一般由2-6个碱基构成一个心序列,心序列串联重复排列,由心序列重复数目的变化产生长度多态性。那么DNA分型理想的STR基因座标准是?
目前在人基因组中已发现8000多个STR基因座,但不是所有的STR基因座都适用于学检验应用。从实用价值考虑,检验用STR基因座应具备以下特点:
1、等位基因片段长度在95-500bp范围,更好在bp以下;
2、具有较高的杂合度以及个人识别能力,一般杂合度在70%以上,DP>0.90;
3、重复序列结构简单,不含有较高都可变的重复单位序列,较少或没有插入等我基因。更好是具有规律的四苷酸或五苷酸重复序列;
4、等位基因数10-12个,等位基因易于分;
5、当与其他基因座复合扩增时,重复性好;
6、突变率低,不超过0.02%;
7、具有高度种属特异性。
亲子鉴定之STR基因座检测
一个人的遗传物质(即DNA序列)都是独一无二的,其中一半来自父亲,一半来自母亲。正常情况下,一个人的遗传物质在一生当中会保持不变,且在各组织之间也是相同的(如皮肤和血液)。
DNA亲子鉴定就是通过人类遗传标记的检验和分析来判断父母与子女是否亲生关系。我国早在三国时期就有“滴骨验亲”的记载,这种方法虽然不科学,但却是亲子鉴定的更早应用。自从00年Landsteiner发现人类个血型系统以来,各国的工作者开始使用血型分析技术进行科学的亲子鉴定。86年,英国莱斯特年轻的生物学家亚历克・杰弗里斯(Alec Jeffreys)建立的DNA指纹技术首次应用于一桩案件,自此亲子鉴定从蛋白质水平进入到DNA水平,实现了质的飞跃。
STR简介
STR:Short tandem repeat,短串联重复序列,也叫做微卫星DNA或简单重复序列(SSR),是一类广泛存在于真生物基因组中的DNA串联重复序列。其心序列为2-6 bp,重复次数通常在-30次,广泛分布在人类基因组中,约占整个基因组的3%。多数的STR基因座具有多态性,其高度多态性主要源于心序列重复次数的个体间差异,这种差异在基因传递的过程中一般遵循孟德尔共显性遗传规律。
作为一个重要的遗传标记系统,STR被称作第二代DNA指纹技术,并已广泛用于遗传制图、连锁分析、亲子鉴定、个体识别、疾基因定位和物种多态性研究等领域。
STR长度多态性用于学鉴定和亲子鉴定有以下优点:
(1)分布广泛,有高度多态性。
(2)个体识别机率和非父排除率高。
STR在人类基因组中分布极为广泛,且片段小,与传统的蛋白质遗传标记相比,等位基因多,杂合度高,因此,不同个体基因型不同的可能性更大。两个无关个体在14个STR基因座基因型完全相同的可能性仅为1×1014、
少量检材即可满足DNA的提取,将提取的DNA通过PCR扩增,灵敏度比传统的DNA指纹高得多。由于PCR扩增片段长度较短,所以即使仅含降解的DNA陈旧性斑痕,其扩增效率仍很高。
(4)检测方法简单,可实现自动化操作。
STR检测流程
样本采集
可用于DNA鉴定的样本有多种类型,更常用的是血液、血痕、带毛囊的毛发、口腔黏膜细胞(口腔拭子)等,其它特殊样本如指甲、口香糖、烟蒂、精斑、混合斑、胎儿羊水、脐血、石蜡包埋组织、石蜡切片等也可用于检测。
检测及分析
通过特异引物(引物末端标记荧光基团)的设计和PCR过程,将STR基因座扩增出来,得到的PCR产物带有荧光信在毛细管电泳过程中可以被探测并识别。采集到的荧光信经过分析比对,转换为基因型数据。
结果判读
三联体亲权鉴定至少要检测个STR基因座,若发现1个矛盾基因座,则增加至个基因座;若发现2个矛盾基因座,则增加至28个基因座;若发现3个矛盾基因座,则增加至35个或以上基因座,若未再出现新的矛盾基因座,将矛盾基因座的父权指数计算累积父权指数(CPI),若达到或超过10000(父权概率为0.9999),可以做出“肯定亲生关系”的。若出现4个矛盾基因座,则直接做出“非亲生关系”。
单亲亲子鉴定至少要检测个STR基因座,若发现1个矛盾基因座,则增加至29个或以上基因座;若发现2个矛盾基因座,则增加至41个或以上基因座。将矛盾基因座的父权指数计算CPI,若达到或超过10000(父权概率为0.9999),可以做出“不排除亲生关系”或“支持存在亲生关系”的。
鉴定结果如果是认定亲子关系,则认定;如果结果是排除亲子关系的,鉴定机构一般会对样本二次检测,以确保结果的准确性。
参考文献
胡洁。STR在亲子鉴定中的应用。福建医药杂志, 2000, 22(5):104-105、
伍新尧。用STR分型技术作亲权鉴定时判断标准的研究。中山学报(医学科学版), 2010, 31(1):1-6、
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