1、DNA提取标准操作规程1、 目的：规范不同检材的DNA提取操作程序，确保DNA质量，保证STR分型结果准确性。2、 原理：Chelex-100 是一种由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成的化学螯合树脂，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，可螯合多价离子，特别是对高价金属离子有很高的亲和力和螯合作用。在低离子强度、碱性及煮沸的条件下，可以使细胞膜破裂，并使蛋白质变性，通过离心除去Chelex颗粒，使其结合的物质与DNA 分离。磁珠法提取酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间之后，再在磁场作用下，使磁性颗粒与液体分开，
2、回收颗粒（即磁珠-DNA 混合物），再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。3、 操作者：具有检验资格的广西鉴定所技术人员。4、 标本：5EDTA抗凝全血、8-10ml胎儿羊水、5EDTA抗凝脐血、FTA纸血斑、口腔拭子、5-10根带毛囊的毛发、绒毛细胞。5 试剂：5.1 试剂的厂家及规格：5.1.1 DNA抽提试剂 Chelex-100 伯乐公司（Bio-Rad Laboratories, Inc。 CA U。S。A）。5. DNA抽提试剂 Promega PP或PP21 DNA System抽提试剂盒。5.1.3 DNA抽提试剂 口腔棉签制备基因组DNA试剂盒（G
3、&T，U。S。A）5.1.4 无水乙醇 分析纯5.1.5 异丙醇 分析纯5.1.6 无菌的超纯水由实验技术人员制备。5.2 试剂的配制：5.2.1 5Chelex-100的配制：称取5克粉状Chelex-100于试剂瓶中，加入灭过菌的超纯水至100ml。5. 灭菌超纯水的制备：用干净的试剂瓶装超纯水1升左右，经121灭菌30分。6 仪器及设备：6.1 生物安全柜。6.2 高速离心机。6.3 超速冷冻离心机。6.4 移液器，单道微量移液器（0.5-10 ul单道）、单道微量移液器（10-100 ul单道）、单道微量移液器（100-1000 ul单道）、八道移液器（0.5-10 ul八道）
4、和八道移液器（10-100 ul八道）。6.5涡旋混匀器。6.6半导体温控混匀器。6.7超纯水制造系统。7 操作程序：7.1 全血或脐血的DNA抽提（Chelex-100法）7.1.1填写“PCR-STR基因扩增实验记录表”。7. 按照PCR-STR基因扩增实验记录表顺序标记1.5ml EP管，加无菌超纯水980ul。7.1.3对血样，用移液器混匀，吸取1.5ul标本于EP 管中（-80存放超过一个月的血样取2-3.5ul）。7.1.4颠倒混匀，12600rpm离心3.5min，弃上清，剩余沉淀约20ul。7.1.5 加无菌超纯水980ul，颠倒混匀，12600rpm离心3.5min，
5、弃上清，剩余沉淀约20ul。7.1.6取混匀的5% Chelex-100溶液200 ul于EP管中（吸取时注意先摇匀5% Chelex-100），盖紧EP 管，振荡约20sec后， 56孵浴0.52h。7.1.7 孵浴结束后振荡约20sec， 99孵浴8 min。7.2羊水或绒毛A抽提（Chelex-100法）7.2.1填写“PCR-STR基因扩增实验记录表”。7. 按照PCR-STR基因扩增实验记录表顺序标记1.5ml EP管，加无菌超纯水700ml。7.2.3对标本，用移液器混匀，吸取300ml于EP 管中。7.2.4颠倒混匀，12600rpm离心3.5min，弃上清，剩余
6、沉淀约20ul。7.2.5 加无菌超纯水1000ul，颠倒混匀，12600rpm离心3.5min，弃上清，剩余沉淀约20ul。7.2.6取混匀的5% Chelex-100溶液200 ul于EP管中（吸取时注意先摇匀5% Chelex-100），盖紧EP 管，振荡约20sec后， 56孵浴0.52h。7.2.7 孵浴结束后振荡约20sec， 99孵浴8 min。7.2.8 孵浴结束后趁热振荡约20sec，12600rpm离心3.5min，上清即为DNA溶液。7.3 毛发的DNA抽提（Chelex-100法）7.3.1填写“PCR-STR基因扩增实验记录表”。7. 按照PCR-S
7、TR基因扩增实验记录表顺序标记1.5ml EP管，加无菌超纯水980ul。7.3.3对血样，用移液器混匀，吸取1.5ul全血于EP 管中（-80存放超过一个月的血样取2-3.5ul）。7.3.4颠倒混匀，12600rpm离心3.5min，弃上清，剩余沉淀约20ul。7.3.5 加无菌超纯水980ul，颠倒混匀，12600rpm离心3.5min，弃上清，剩余沉淀约20ul。7.3.6取混匀的5% Chelex-100溶液200 ul于EP管中（吸取时注意先摇匀5% Chelex-100），盖紧EP 管，振荡约20sec后， 56孵浴0.52h。7.3.7 孵浴结束后振荡约20sec，
8、99孵浴8 min。7.3.8 孵浴结束后趁热振荡约20sec，12600rpm离心3.5min，上清即为DNA溶液。7.4 血斑的DNA抽提（磁珠法）7.4.1填写“PCR-STR基因扩增实验记录表”。7.4.2 按照PCR-STR基因扩增实验记录表顺序标记1.5ml EP管，对样本，7.4.3剪取合适大小的样品（2-3mm2）放置EP管中。7.加入Lysis Buffer 0ul盖紧盖子70孵育30min。7.4.5温下，12000rpm离心2min，吸取上清至一新1.5ml离心管中。7.4.6将漩涡震荡10s，将resin混匀，取7ul resin加入到样品中。7.4、
9、7高速漩涡震荡样品/Lysis Buffer/resin混合液3秒钟，温孵育5min，并且每孵育1min震荡3秒。7.高速漩涡震荡2秒，将离心管放置磁力架，resin与溶液分开（注1）。7.4.9小心吸弃溶液不要碰到聚集成块的resin（注2）7.4.10加100ul 准备好的Lysis Buffer洗涤，将离心管移出磁力架，高速漩涡震荡2秒。7.4.11将磁力架再次置于磁力架，将Lysis Buffer吸弃干净。7.4.12加入100ul准备好的1X Wash Buffer，移出磁力架，高速漩涡震荡2秒立即放回磁力架，吸弃Wash Buffer，连续洗涤3次，更后1次洗涤将Wash
10、Buffer移除干净。7.4.将离心管盖子打开，温下干燥5-20min。7.4.14加100ul Elution Buffer，盖上盖子漩涡震荡2秒，65孵育5min。7.4.孵育后，漩涡震荡2秒后再次放入磁力架。小心吸取DNA溶解液至一新离心管中，保存（注3）。注1：如果resin不能形成明显的一团与溶液分开，则重新震荡迅速放置磁力架上。注2：如枪头不小心吸到resin，则轻轻打回再次分离。注3：DNA可以4短期保存或-20、-70长期保存。7.5 口腔拭子的DNA抽提（试剂盒）7.5.1填写“PCR-STR基因扩增实验记录表”。7.5.2 按照PCR-STR基因扩增实验记录表顺序
11、标记1.5ml EP管。7.5.3对标本，将棉签正规（约1.5厘米长）剪短，置于标记好的EP管中。加入600微升SWA溶液，使棉签浸泡在溶液中。7.5.4盖紧EP管盖子置振荡器剧烈震荡20秒，使黏附在棉签上的口腔细胞脱落到液体中。震荡后会出现很多气泡。7.5.5 60温浴10分钟，充分裂解。7.5.6温浴结束，待冷却到温后用镊子夹住棉签头，在试管壁上挤压出所吸附的液体后废弃棉签头。镊子用酒精纸巾擦干净后可直接用于其他样品。根据不同种类棉签，这时试管中液体体积大约在到450微升之间。7.5.7 加入0微升试剂SWB，颠倒混匀数次，透明溶液变成白色浑浊液。7.5.8 以每分钟00
12、0转离心10分钟，用加样器吸取透明上清液置于另外一干净的EP管。溶液体积大约在540到600微升之间，会观察到溶液出现浑浊现象。吸样时注意必须保留管底30到40微升沉淀物，内含细胞残渣和蛋白质沉淀。7.5.9 在以上取得的溶液中加入微升异丙醇，颠倒混匀30次使DNA充分沉淀。这时肉眼看不见丝状DNA沉淀。7.5.10 以每分钟000转离心分钟，小心吸弃上清液，不要接触试管底DNA沉淀。7.5.11 加入500微升75%乙醇，以每分钟000离心5分钟。尽量吸弃上清液。然后打开EP管盖置温5分钟，使残留乙醇挥发干净。7.5.12 加入100微升TE缓冲液。置温过夜或65小时，
、使DNA充分溶解。4保存备用，-20或-80长期保存。8、 防护8.1 实验过程中须穿上专用的实验服，带帽子和口罩，带一次性的PE手套或无粉橡胶手套。如果手套破损、刺破、或失去其屏障功能，则应尽快更换。8.2 实验操作必须在生物安全柜中进行。8.3 如果不小心被血样溅到皮肤，立即用75的乙醇擦拭消毒，然后用自来水冲干净。溅到眼睛，立即用洗眼器清洗。8.4每天工作前和工作后对实验进行常规消毒并做好记录：每天工作前生物安全柜和空气用紫外线照射30分钟以上，工作结束后空气用紫外线照射60分钟以上。8.5衣物污染时，尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理。发
14、生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验主管领导和安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序。9、 注意事项9.1在实验完毕后实验台面及桌面，实验垃圾放到指定位置，由清洁人员拿走处理。9.2 在实验完毕后，按实验清洁消毒程序进行清洁、消毒工作，并填写实验消毒登记表。9.3在实验工作结束后或取下手套后应立即洗手。在离开实验之前应脱下所有的个人防护装备。9.4 在离开实验之前应关掉所有仪器的电源并拔下插头（生物安全柜除外）。10、 参考文献：1) 杨本海,刘永忠。 Chelex-100一步法快速提取外周血DNA。 皖南医学院学报,99 , (1): 9-10、 2)。 陈辉,刘永波,等。 有机酚法和Chelex - 100 法提取不同组织微量DNA 效果比较。 郑州学报(医学版).2004,6(39):988-991.3)。 步嵘,王耀平,等。 以Chelex 100 为介质抽提DNA。 安康理学杂志.99 , 5 (28) :379-380.4)。 Walsh PS , Metzger DA , Higuchi R。 Chelex-100 as a Mediumfor simple extraction of DNA for PCR-Based typing fromforensic material 。 Biotechniq
不同地的亲子鉴定收费标准不同，但亲子鉴定价格相近。一般来说，普通的个人亲子鉴定和亲子鉴定的价格都在3000元左右，这是合理的。这里详细介绍了亲子鉴定需要提供什么，并快速收集相关知识。
办理亲子鉴定需要通过哪些手续？
1、并理解。通过安康DNA亲子鉴定中心,确定您适合哪种亲子鉴定，并确定是自己采集样本还是在鉴定中心采集样本，或者预约DNA亲子鉴定中心的上门取样服务。
2、收集样本。个人亲子鉴定可以在家采集样本，也可以委托在家采集样本，当然也可以由鉴定中心的专注人员采集。但是，亲子鉴定要求所有鉴定人携带鉴定文件到鉴定中心进行抽样。
3、付款和付款。取样后，尽快送至评估中心，评估中心可以现场支付现金，也可以通过网上转账汇款支付。
4、实验鉴定。收到样品和付款后，实验开始进行脱氧糖酸鉴定。一般来说，需要5个工作日出结果和7个工作日出报告，加速可以快至3小时。
5、拿到评估报告。评估结果可通过电话或短信告知，评估报告可由评估中心收集或由亲自邮寄给客户。
亲子鉴定的时间和流程
知道结果需要7个工作日
亲子鉴定也需要一定的过程，每个过程都需要一些时间。一般来说，亲子鉴定的结果需要7个工作日，大约8-10天。
1、提供证书
当事人必须提供身份证(护照)、证明、户口簿等有效证件的原件，经鉴定机构对无误后，复印存档，原件应立即返还给当事人。
2、填写申请表
当事人需要亲自填写亲子鉴定申请表，包括当事人的基本信息。年幼且没有书写能力的孩子可以由父母填写，然后由他们的指纹确认。
3、拍照
亲子鉴定机构将为当事人拍照存档，照片将用于亲子鉴定报告。
4、抽样
从每个人身上采集血样，通常是2-3滴手指血或脚趾血。血液采集完成后，需要采集方的签名，并通过采集方的指纹进行确认。当事人支付亲子鉴定费用。
5、识别
也就是说，评估中心对样本进行评估。
6、收到报告
亲子鉴定报告可以通过协议从鉴定中心获得，也可以委托鉴定中心邮寄。
安康?如何获得99.99%的亲子鉴定准确率
步：准备检查？
唾液滴不能混在里面？
在进入安康鉴定所的实验大门之前，小编被要求穿上鞋套和干净的衣服。实验者全副武装：一次性帽子、口罩和手套都是必不可少的。
第二步：提取脱氧糖酸？
在100下孵育10分钟以挤出脱氧糖酸？
目前，更常用的方法是通过血液来鉴定DNA，即采集血样进行鉴定。
步：冷藏？
试剂和脱氧糖酸样本混合良好？
取样后，将脱氧糖酸提取物放入冰箱备用。提取物冷却后，取出一个较小的试管，其中含有试剂盒中制备的试剂。
第四步：放大？
脱氧糖酸提取物不断繁殖和分裂？
为了满足检测的需要，小试管应该放入一种叫做放大器的仪器中。试管放入放大器后，里面的脱氧糖酸提取物会不断增殖和分裂。
第五步：测试？
提取21个位点的数据进行比较？
这项测试是在一种叫做3500XL的基因分析仪中进行的，这种分析仪非常先进。将扩增后的小试管放入仪器后，该装置会自动从试管中提取DNA提取物，然后自动选择DNA位点并分析染色体。在正常情况下，设备会自动提取21个基因座，然后，系统会自动比较需要亲子鉴定的两个样本。
亲子鉴定是运用医学、生物学和遗传学的理论和技术，分析遗传特征，判断父母和子女是否有血缘关系。常规样品的检测包括以下步骤(这里以毛细管电泳仪和荧光标记试剂盒为例):
步：提取样本细胞中的脱氧糖酸，并纯化和去除样本中的杂质。
第二步：将酶反应检测的DNA片段放大到特殊仪器可以清楚看到的程度。
步：打开了脱氧糖酸双螺旋结构的双链，并添加了一些内部检测标准来标记被检测片段的长度。
根据第四步：毛细管测序仪的检测，不同片段长度的DNA用毛细管电泳方法电泳速度不同，在相同的电荷和电泳时间下，游动距离也不同。这些不同长度的距离可以通过前期增加的内标测量来标记，并可以通过一定的软件显示在计算机上，方便检查人员对数据进行处理和分析。
第五步：检查员将对结果进行分析、和计算，然后给出鉴定和报告，这就是DNA亲子鉴定的全过程。
个人亲子鉴定和亲子鉴定一般报告5-7个工作日出结果，更早可加急3小时；隐私7项胎儿亲子鉴定工作的结果更早可以加急48小时，但都要承担一定的加急费用。
亲子鉴定在哪里做？
1、：这并不是说所有的都可以做亲子鉴定。相反，只有少数拥有脱氧糖酸实验和相关资质的可以进行亲子鉴定，这种鉴定只在省会城才有。
2、评估机构：该类机构是隶属于当地部门的方机构，对外开放。当然，它必须有相关的资格，鉴定人和脱氧糖酸实验。很少，一个省只有几个。
怀孕期间需要进行亲子鉴定时，会有一些特殊情况。许多孕妇会问如何做胎儿亲子鉴定，在哪里做胎儿亲子鉴定。怀孕期间做胎儿亲子鉴定有两种方法：
首先是从母体血液中提取胎儿的脱氧糖酸，然后确定谁是胎儿的孩子。这种检测技术仅处于存在和临床应用阶段，并不是一种被广泛认可的手段。这种检测方法只能在一些基因公司操作。
另一种亲子鉴定是提取羊水进行检测。在这种情况下，应该首先从子宫中提取羊水，然后提取胎儿的遗传物质，以便与男子进行鉴定。首先，应在进行羊膜穿刺术，提取羊水，然后在机构进行亲子鉴定。这两种测试方法适用于不同的机构。
精子不同于精液，只要没有污染，就可以通过尽快把它送到鉴定中心来确认。如果你以后想知道它是谁的精囊，你也可以做脱氧糖酸鉴定，你需要提供可疑人的样本进行比较。
精子也是DNA亲子鉴定中常用的样本，它被用作可疑父亲的样本。除了精囊，血迹和口腔拭子也是更常用的亲子鉴定样本。如何正确采集血样？
血痕是更常用的亲子鉴定样本，也是亲子鉴定的默认样本，因为容易采集，DNA含量多而被认为更适合亲子鉴定的样本。
安康DNA亲子鉴定中心是一家专门从事亲子鉴定的服务机构。目前，已与多家权威鉴定机构和基因检测公司建立了长期合作关系，总部设在深圳。为向客户提供专注权威的DNA亲子鉴定服务，出具的鉴定报告具有效力，广泛应用于儿童户口、法庭纠纷证据、出国等领域。
以上是关于亲子鉴定需要提供什么的介绍，希望对大家有所帮助。如果您有任何其他问题，可以我们的在线客服。
我叫李芳，今年36岁，我跟老公很早就认识了，我那时候还是别人的女朋友，只是我年轻不懂事，他得到我的身子以后，就提出跟我分手了，我很无助，很彷徨，老公那时候还是个打工，知道了我的情况后，就经常旷工陪我，安慰我。实在让我挺感动的，顺理成章的我内心被打开跟了老公。
我们很快就结婚了，婚后八个月就生下了女儿，我曾经怀疑女儿该不会是前男友的吧！可是说孩子只是早产，我就放弃了这个想法。
老公婚后就辞职去干装修，我一直感激老公不嫌弃我的过去，也是尽心尽力的帮助他。，拿出自己所有的积蓄，还跟我爸妈要了一笔钱，我们夫妻一块努力的躯干，我经常客串小工，抗沙袋，抗地板砖上高，那时候真的很累，我都咬牙坚持下来了。
慢慢的，我们越干越出色，老公组建了一个装修队，还开了一家小公司。也就不需要我在帮忙了，我就回到家庭专职带好女儿，但是老公却越来越忙，经常性的十天半月看不到他的身影。
五年前，老公喝的醉醺醺的，回家后二话不说就拍了一张报告给我。我打开一看，儿和老公的亲子鉴定报告，报告显示没有血缘关系，我想到当年的怀疑，就连忙跟老公解释。
可是老公根本就不听，一直骂我给他戴绿帽子了，说他都没脸出去见人，要是被他合作伙伴知道了，他还有什么脸跟人家谈合作。完了老公就求我放过他，净身出户跟他离婚吧！我是在不知所措，又禁不住他苦苦哀求，心里也觉得有愧于他，就答应了，什么都没要 就带着女儿走了。
离婚后，我回了娘家，女儿我爸妈给带着，后来我听说离婚没多久，他就带回一个大肚子的很漂亮的女人结婚了。我内就特别怀疑，这里面是不是有什么我不知道的事。慢慢的女儿越长越像老公，我的疑惑更大了。
前些时候，五年来对我们不闻不问的老公突然上门了，一上门就求我带着女儿去救救他儿子，我说我女儿跟你儿子有什么关系，怎么去救他。老公支支吾吾的说出了实情，原来女儿确实是他亲儿，那份鉴定报告是他找人伪造的。之所以这么做，是因为他在外面有人了，还怀孕了检查是个，他想跟我离婚娶外面的女人，才这样做的。
当初他二婚后，二婚妻子要求把房子全面装修，说是不想住别人住过的房子，没想到就是这次装修害了他们的孩子，孩子前些时候被查出得了白血，一直没有合适的骨髓源，想到我女儿跟他是同父异母的姐弟，就过来想要接女儿去救救他弟弟。
听完后，我真是气笑了，一开始眼瞎，没想到我第二次还是眼瞎，我觉得我以后真不能再婚了，就单身带着女儿过吧！至于让女儿去救他儿子的事，我拒绝了，我想不出有什么要答应的理由。我爸妈也把他推出大门，无论他怎么敲门，我们就是不理会，更后他跪在我家大门前，求我们开门，我们依然不为所动，你们说我是不是太心狠了？
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2023-12-25
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