DNA亲子鉴定的原理及步骤是什么？每个人的DNA遗传物质都是一半来自母亲，一半来自父亲；因此孩子的一对等位基因也就是一个来自母亲，一个来自父亲。如果对多对等位基因进行检测，鉴定结果如果全部符合这一规律，则表明具有生物学意义上的亲子关系；若不符合这一规律，则排除亲生关系（变异情况除外）。在大多数的情况下，母、子关系是已知的，要求鉴定设父和孩子是否具有亲生关系。此时只要对比孩子与设父的基因型，如果每一对等位基因中孩子与设父都出现相同的基因型，则可以认定具有亲子关系。如果等位基因中孩子与设父出现两对或两对以上的不匹配的基因型，则可排除设父与孩子的亲生关系。通常通过对、对甚至更多对这样的STR基因位点检测，可以达到认定是否具有生物学意义上的亲子关系。
DNA亲子鉴定目前在社会上已经是一项很成熟的技术了，DNA亲子鉴定是目前更准确的亲权鉴定方法，在单亲的DNA亲子鉴定中，如果小孩的遗传位点和被测试男子的位点有3个以上包括3个的基因位点不一致，那么该男子便100%被排除血缘关系之外，即他绝对不可能是孩子的父亲。如果孩子与其父母亲的位点都吻合，我们就能得出亲权关系大于99.99%的可能性，即证明他们之间的血缘亲子关系 如果出现两个或一个基因位点不一致的话，就可能出现了百分之1.4基因突变的情况，那时就需要补充母亲的样本再进行验证了。
一、DNA亲子鉴定的原理
通俗地讲，一个个体的DNA从父母处获得，而且也只能从父母处获得，其中父母的机会均等，父亲将自己的DNA奉献给孩子一半，母亲也给了一半，孩子各带有父母一半的DNA，孩子不可能带有父母没有的DNA，这是基本的遗传规律。
DNA鉴定就是根据这种遗传规律，对父亲、母亲、孩子的DNA进行检测，如果发现孩子带有父亲或者母亲没有的DNA，则可以排除亲子关系，如果经检测孩子确实带有一半父亲、一半母亲的DNA，然后再进行一些统计学方面的计算，以排除大规模人群中非父母子关系偶然出现的DNA一致的情况，更终确定父母子关系。
二、DNA亲子鉴定的步骤
这里我们选择毛细管电泳仪和荧光标记试剂盒检测进行介绍。从获得样本以后开始，常规样本的检测步骤如下：
步：DNA提取
就是把样本细胞中所含有的DNA提取出来，然后进行一定的纯化，去除样本中的杂质。
第二步：PCR扩增
PCR的中文名为聚合酶链式反应，简单的说，PCR扩增这一步就是把我们所需要的片段通过酶促反应，放大到通过某些专用仪器可以看到的程度。
步：后PCR反应
这一步主要是上测序仪检测的准备阶段，将双链的DNA打开，加一些检测用的的内标，主要是用来标记检测的片段长度。
第四步：毛细管测序仪检测
由于DNA带有电荷，通过毛细管电泳的方法，不同片段DNA长度的电泳速度不同，在同样的电压，同样的电泳时间下，泳动的距离不同，这些长短不同的距离可以通过前期加入的内标测量分辨出来，同时可通过一定的软件显示在电脑上，方便检测人员处理和分析数据。
第五步：分析数据，出具报告
主要是检测人员将所得结果进行分析汇总、计算，然后出鉴定和报告。
DNA鉴定中心鉴定所的专家告诉我们，上面的步骤为常规样本（血液、血痕、口腔拭子、带毛囊的毛发）的常规检测步骤，不包含一些特殊样本的前期处理。比如骨骼、牙齿、精斑、混合斑等样本，还需要一个复杂的前期处理过程，有的还需要二次消化，比常规检测的步骤要多很多，而且操作相对精细和麻烦。
亲子鉴定的经典步骤如下：
(步骤1)从血液、口腔黏膜等载体上提取细胞，通过物理或化学方法破坏细胞膜和膜，释放细胞内的DNA;
(步骤2)使用试剂盒，通过pCR技术将微量的DNA通过反应后变成能达到检测需要的量;
(步骤3)将样本放入遗传测序仪，通过电泳检测，得到分析结果;
(步骤4)检测人员对检测结果进行评估和统计学计算，得出更终。
个人亲子鉴定纱布血(血痕、血斑)的采集方法:
清洁双手，酒精(不要用碘伏)消毒采血部位，用一次性采血针快速取指尖血或耳垂血，较小宝宝可用足底血，挤出3-5滴米粒大小，用单头医用棉签(3根)或干净纸巾擦拭，也可将收集卡轻放在血液上方(注意不同位置)，将样本放置内自然阴干，然后分别放入纸质信封中(不要用塑料袋，避免密封后起潮霉变)，并作好相应标记(如：采集日期，样本名称：父亲、母亲、小孩及)。
dna亲子鉴定是什么时候才有的
更早的DNA鉴定是用于的，因为当时技术不够纯熟，所以只供参考，没有记录。不可考证。世界上列亲子鉴定是加纳85年。国内是91年。
dna亲子鉴定是82年才有的，国内是85年开始应用。
年有亲子鉴定。DNA亲子鉴定是82年才有的，国内在85年开始广泛应用。亲子鉴定技术是由国外传到我国的。DNA全名是脱氧糖酸，是染色体的重要组成部分。
亲子鉴定一般在5-7个工作日出结果，也可以采取加急处理，常见的有8小时、2天、3天出结果。
目前亲子鉴定行业的亲权鉴定技术规范是安康人民部鉴定管理局2010年04月07日发布实施的。之前的研发应用于场大概在2007年就开始了。一开始还是使用的国外的试剂盒。
更早在三国时期就有了，以前是滴血认亲，滴骨认亲。后面孟德尔提出遗传学说后，就慢慢开始使用DNA亲子鉴定了。
dna检测技术是从哪一年开始应用在刑侦上的
国内将DNA用于犯罪检测是87年。国内警方在87年首次将DNA检测技术应用于侦查破案，经过20多年的发展，DNA检测技术已经广泛应用于侦查办案和法庭取证上。
年，伦敦警察厅正式引进指纹分类系统，之后该技求迅速在全世界流行。84年，DNA技术开始被用于刑侦。国内警方在 87年首次将DNA检测技术应用于侦查破案。95年，世界上个国家级DNA数据库在英国建成并完善。
自95年个国家级DNA数据库在英国诞生以来，许多国家纷纷仿效，截至2004年下半年，76个国家已经或计划建立DNA数据库。
自87年国内警方首次将DNA检测技术应用于侦查破案。由于DNA 指纹提供了丰富的个体特异性遗传标记，因而在学鉴定中具有重要意义。
将DNA技术用于刑侦更早可追溯到上世纪80年代的美国。
之后该技求迅速在全世界流行，84年，DNA技术开始被用于刑侦。国内警方在87年首次将DNA检测技术应用于侦查破案，95年，世界上个国家级DNA数据库在英国建成并完善，此后，该技术在全世界范围内迅猛发展。
亲子鉴定国内哪年开始的
1、目前亲子鉴定行业的亲权鉴定技术规范是安康人民部鉴定管理局2010年04月07日发布实施的。之前的研发应用于场大概在2007年就开始了。一开始还是使用的国外的试剂盒。
2、亲子鉴定真正的起源在八十年代，但是以电泳跑胶的技术为主，随着技术的发展，在九十年代出现自动测序仪等使误差逐渐减少，直到后来的检查步骤、检查位点和数据库的标准化，亲子尖端技术得到真正的完善。
3、年有亲子鉴定。DNA亲子鉴定是82年才有的，国内在85年开始广泛应用。亲子鉴定技术是由国外传到我国的。DNA全名是脱氧糖酸，是染色体的重要组成部分。
4、亲子鉴定技术其实是由国外传到我国的，国外的DNA亲子鉴定技术可以追溯到20世纪60年代，那时国外的生物遗传技术进入到快速发展期，许多生物学家都对DNA亲子鉴定技术进行了深入的研究，并在后来逐渐传入到我国。
5、我国在20世纪80年代初，由上海中心血站引入HLA分型技术开始应用于亲子鉴定，其后被更高人民法院认可，正式开展了亲子鉴定。此后，全国许多单位陆续开展了亲子鉴定的业务。
6、自87年国内警方首次将DNA检测技术应用于侦查破案。由于DNA 指纹提供了丰富的个体特异性遗传标记，因而在学鉴定中具有重要意义。
亲子鉴定技术什么年代出现
目前亲子鉴定行业的亲权鉴定技术规范是安康人民部鉴定管理局2010年04月07日发布实施的。之前的研发应用于场大概在2007年就开始了。一开始还是使用的国外的试剂盒。
解决活人之间的亲权的记载大约开始于明代，出现了一种接近于血型检验的“合血法”。近代以血型检验为基础进行亲子鉴定始于德国，31年美国也开始有了亲子鉴定的案例。
DNA鉴定技术的出现年代是二十世纪八十年代。DNA鉴定技术是英国遗传学家A·J·杰弗里斯（50－）在84年发明的。由于人体各部位的细胞都有相同的DNA，因此可以通过检查血迹、毛发、唾液等判明身份。
二十世纪七十年代，人们发现可以用白血细胞的抗原来进行亲子鉴定，准确性可达80%。再结合血型检验，能达到较高的准确程度。
dna亲子鉴定是82年才有的，国内是85年开始应用。
所以都不能算真正的亲子鉴定。亲子鉴定真正的起源在八十年代， 知道了血型和基因型的关系，就可以通过血型来推导可能的基因型，并对父母和子女的基因关系做出判断。上世纪二十年代，这项技术就开始被用到了亲子鉴定里。
96年有dna检测技术吗
1、DNA是69年开始有的。 DNA更早是一名瑞士在69年发现， DNA亲子鉴定是82年才有的，国内在85年开始广泛应用。 DNA全名是脱氧糖酸，是染色体的重要组成部分。
2、[历史回顾]73年，美国科学家、生物化学家斯坦利·科恩(Stanley N。Cohen)将蟾蜍基因植入细菌的DNA中，完成历史上首次转基因试验。82年，美国孟山都公司的科研人员次在人类历史上改变了植物细胞的基因。
3、国内将DNA用于犯罪检测是87年。国内警方在87年首次将DNA检测技术应用于侦查破案，经过20多年的发展，DNA检测技术已经广泛应用于侦查办案和法庭取证上。
4、接着，警方又再次接到报案，在水佐岗和龙王山等地相继发现尸块。因为当年并没有DNA检测技术，所以警方只能根据尸块上的体貌特征和肌肉纤维组织进行辨认，初步确认受害者为女性。进行调查之后，确认了死者正是失踪的刁爱青。
1、DNA检验技术在以及亲 子鉴定中的运用 DNA检验技术在的应用检验技术在的应用 一、DNA存在的部位： 细胞有原细胞和真细胞之分。原细胞比真细胞小， 结构也简单得多，它除了表面的细胞膜以外，没有成形的细 胞，也没有其他细胞器，但有一个被称为染色体的环状 DNA分子，它和RNA、酶等组成一个基因转录转译系统，此外， 细胞质中还可含有一些小分子DNA，称为质粒。真细胞比 原细胞大，有细胞膜（植物细胞膜外还有细胞壁）、细胞 （包括膜、质、染色质及仁等）、细胞质、细胞器 （线粒体等）。 高等动物由真细胞组成，有二套遗传物质，即DNA，一 套位于细胞染色质内，一套位
2、于细胞器线粒体内。细胞的 遗传物质没有组织特异性，有个体、种属特异性。 真细胞染色质的主要成分是DNA和蛋白质。人 的每个体细胞有23对46条染色体，为双倍体，其中 22对44条为常染色体，共有，另外一对决定性 别，为性染色体，女性为XX，男性为XY。每对常染 色体中之一分别来自父、母亲，叫做同源染色体。 人的精子及卵子中仅有23条染色体，为单倍体。以 着丝粒为界，每一条染色体的两臂分别命名为p （短臂）及q（长臂），p、q两臂以着丝粒为中心 又细分为、带等。（见下图） 线粒体是细胞呼吸及能量代谢中心，含有DNA及 糖体，有自己的一套遗传系统，能按照自己的 DNA信息编码合成一些蛋白
3、质，组成线粒体的蛋白 质约有10%就是由线粒体本身DNA编码合成的。 二、遗传标记： 1、 遗传多态性（genetic polymvr phism）：在随 机交配无血缘关系的群体中，个体的一种遗传 性状存在两种以上具有相对差异类型的现象称 之为遗传多态性。 2、 平衡多态性：遗传多态性可能以不同的类型 按一定比例在几代仍维持不变称为平衡多态性。 3、 遗传标记：具有平衡多态性的遗传性状，作 为标志用以识别携带它的个体、细胞、染色体 或用以研究家系和群体的遗传方式时，称为遗 传标记。 遗传标记分为：表型 、基因和基因型。 基因是指位于染色体上的一段DNA序列，能够 表达出特定的功能，决定特定的遗
4、传性状。 基因座基因在染色体上的位置。 等位基因位于同源染色体上，相同座位的一对 基因称为等位基因。 基因型（genotype）是指该基因座上成对等位基因 的组成。 纯合子与杂合子 ： 一个基因座上成对的等位基因相同时，称该基 因座为纯合子；不同时称为杂合子。 表型（pheno type）是指通过一定手段观察到的个体 性状。 三、DNA的结构与理化特性： 1、DNA的基本结构： DNA的基本结构单位是苷酸，由磷 酸，糖和碱基组成。酸分为脱氧糖 酸（deoxyribonucleic acid）和糖酸 （ribonllcleic acid）两大类。 每一个苷酸分子含有一个戍糖（ 糖
5、或脱氧糖）分子，一个磷酸分子和 一个含氮的有机碱。 有机碱分子分两类：一类是嘌呤，一类是嘧啶。 嘌呤包括腺嘌呤（adenine, A） 鸟嘌呤（guanine, G） 嘧啶包括 胸腺嘧啶（thymine,T） 胞嘧啶（cytosime,C） 尿嘧啶（uracil,U） 戍糖分子上位碳原子与嘌呤或嘧啶结合， 就成为苷。如果是脱氧糖形成的苷就是 脱氧糖苷，如果戍糖是糖，形成的苷 就是糖苷。 一个苷与一个磷酸的分子结合，就构成一个 苷酸（nucleotide,nt）磷酸与糖或脱氧糖 结合的部位通常是糖或脱氧糖的第3位或第5 位碳原子。即3端和5端。 多个苷酸以磷
6、酸顺序相连而成长链的多苷 酸分子，即构成酸的基本结构。一般苷酸链 少于50个苷酸的称为寡苷酸。 DNA的碱基构成有4种 A，G，T，C RNA的碱基构成为A，G，U，C 4种。 DNA分子是双链的，这两条链的走向是相反的， 是反平行的。 多苷酸长链是通过磷酸和戍糖的3、5碳 原子共价相连而成的，因此长链的两端是不同 的，一端是3端（3C-OH），一端是5端（5C- PO4）。DNA分子的一条长链是以5 到3,另一条 长链是从3到5、 两链的碱基互相以氢链相连成对，这就是碱 基对（basepair,bp），一般用bp数表示DNA分 子大小。 A总是与 T配对，A、T之间以2个氢键相连
7、； G总是与 C配对，G、C之间以3个氢键相连。 DNA二条长链不是直线形的，而是互相缠绕 而成螺旋形的分子。 真细胞中的DNA碱基序列，很多都是没 有表达功能，没有基因的特征，不能表达为 蛋白质，即为内含子（intron），有基因功 能的不超过10%，为外显子（exon）。 人有46条染色体，约有40亿碱基对，人 DNA有基因功能的不过10%。真细胞DNA 的另一个特点是有许多重复的碱基序列。 人线粒体DNA为双链环状。 2、DNA的复制与变性和复性。 53年Waston和Crick提出DNA双螺旋模型 及DNA自我半保留复制学说。 DNA复制过程： DNA分子2条链分开成单链； 每
8、一条链上所露出来的碱基各自与一 个游离中的互补苷酸碱基相连，即A 和T，G和C相连。 在DNA聚合酶的催化下形成新链，新链 由一条旧链和一条新链组成。 DNA的变性和复性 双链DNA加热至生理温度以上（接近 100OC）数分钟时，双链间氢键断裂，更 后双链完全分开并成为无规线团，这一 过程叫做DNA变性（denaturation）或融 解。（又称为热变性） 加热，过高或过低的PH，有机溶剂， 尿素，甲跣胺等试剂均可使DNA变性。 PH过高引起的变性称为碱变性。 DNA变性是可逆的，只要消除了变性 条件，分开的两条互补链又可重新结合， 恢复原来的链结构，这过程称为复性。 根据酸分子变性和复
9、性的性质，通 过碱基配对使不同来源的两条多苷酸 链的相互结合称为 酸 的 分 子 杂 交 （hybridization）。 四、DNA多态性检验： DNA多态性（DNA Polymorphism）是指一定染 色体一定部位DNA碱基长度或组成在人群中存在差 异。 DNA多态性形成的主要原因是基因的突变。法 医学应用的DNA多态性分为长度多态性（length polymorphism）和序列多态性（sequence polymorphism）两类，前者指等位基因间片段长度 差异，后者指等位基因间的碱基序列差异 学所用长度多态性的结构基础是串联重复 序列，特征为一段称为基序（motif）的D
10、NA呈串联 重复排列。 按基序长短及产生多态性的机制，可以简单 分为小卫星DNA和微卫星DNA。若基序数增减主要 由不等交换机制产生，则基序较长，如8100bp， 称为小卫星DNA（minisatellite DNA）或可变数目 串联重复序列（variable number of tandem repeats, VNTR）；若基序数增减主要由复制滑脱机制产生， 则基序较短，如26bp，称为微卫星DNA （microsatellite DNA）或短串联重复序列（short tandem repeats, STR）。基序的序列是相对不变的。 不同个体间不同的是基序的重复次数。例如，小 卫星DNA中
11、基序的重复次数在不同个体间的变化极 大，在一些个体可能是数十次左右，在另一些个 体可能是数百次。这种DNA的高度变异性是进行个 体识别和亲子鉴定的基础。 （一）长度多态性分型 长度多态性是个体遗传特征在群体中 的反映，对个体遗传标记的表型或基因型 分型的技术方法分为限制性片段长度多态 性(restriction fragment lengthpolymorphism， RFLP)和扩增片段长度多态性(ampli-fication fragment length polymorphism，AmpFLP)。 1、限制片段长度多态性 从不同的组织或细胞中获取大分子的DNA， 一般采用蛋白酶K消化、酚
12、和氯仿抽提蛋白质、 乙醇沉淀DNA的方法。对提取到的DNA定量后， 经限制酶切割成大小不同的片段，琼脂糖电泳 分离后按分子大小排列。用特定DNA探针与含 有串联重复序列的DNA片段进行Southern杂交 并自显影。不同个体串联重复的基序数目不同， 自显影胶片上显示的片段大小就不同。限制片 段长度多态性检测主要包括以下步骤。 (1)DNA的限制性酶切 用适当的限制酶切割 DNA分子。选择限制性内切酶的原则是：重复 序列中无该限制酶的酶切位点，以保证重复序列 的完整性；选择具有较少识别序列的酶，酶切 所产生的片段不至于太多，容易由电泳分离。 （2）DNA限制性片段的电泳分离； （3）DNA片段的
、Southern印迹 电泳分离后， 切片段转移到支持膜上。选用的支持膜通常是硝 酸纤维素膜或尼龙膜。此法更先由Southern建立， 故称为Southern印迹法。用碱使支持膜上DNA变 性，解链成单链分子，再进行分子杂交。 （4）分子杂交 固定在支持膜上的变性DNA片段 与DNA探针进行分子杂交。DNA探针是已知苷 酸序列的带有标记物的单链DNA片段。DNA探针 的标记物分为两类：放射性同位素标记和非放射 性物质标记，后者主要有辣根过氧化物酶、地高 辛、碱性磷酸酶、生物素及光敏生物素等。采用 缺口平移法、随机引物延伸法、末端标记法及光 化学标记法等标记到单链DNA分子上形成探针。 （5）杂
14、交信的显示 杂交后洗去游离的探针， 膜与X射线片重叠，置于暗匣中，杂交DNA片段中 的DNA探针通过放射自显影使X射线片感光，X射 线片显影后在杂交DNA片段对应位置出现黑色条 带，得到DNA图谱。不同个体串联重复的基序数 目不同。 RFLP分析的是基因组小卫星DNA，根据探 针特性有两种类型。一种是多基因座探针（multi- lo-cus probe, MLP）,可以同时与多个小卫星的VNTR 杂交，形成多基因座RFLP图谱，称为DNA指纹 （DNA fingerprint）。另一种是单基因座探针 （single-lo-cus probe，SLP），仅与一个小卫星基因 座的等位片段杂交
、，形成单基因座RFLP图谱，称为 DNA纹印(DNA pfrie)。 DNA纹印中的单基因座探针含有特定基因座的 单拷贝序列，杂交时使用高度严格的条件，一个探 针只能检测一个小卫星域，形成单个基因座的 RFLP图谱。图谱中杂合子呈现为两条带，纯合子呈 一条带。DNA纹印电泳时要加已知长度的DNA片段 作为相对分子质量标准，通过自动扫描设备识别并 构建回归方程，等位片段长度由回归方程估计。 与DNA纹印不同，DNA指纹的技术 心是多基因座探针(multi-locus probe， MLP)。探针由小卫星的串联重复序列构 成。人类基因组中一系列小卫星DNA的 心序列具有相似性，在不严格的杂交
16、 条件下，相似但并不完全相同的串联重 复序列都可以与探针结合,从而能同时揭 示多个小卫星基因座的多态性，形成 DNA指纹。 2、扩增片段长度多态性 扩增片段长度多态性(amplification fragment length polymorphism，Amp-FLP)指通过PCR扩增对 基因组中有长度多态的基因座分型。 聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction， PCR)是一种模拟天然DNA复制过程而建立的体外 酸扩增方法。PCR原理是利用DNA聚合酶的催化作 用，以靶DNA作为模板，由一对引物引导DNA合成， 使两引物间的靶DNA片段得到特异性的扩增。扩增 产
、物的特异性由引物的序列所决定。所谓引物 (primer)人工合成的与待扩增的DNA片段互补的单 链寡苷酸片段。 根据PCR原理，针对具有长度多态的串联重复序列的侧翼 序列设计一对引物，PCR扩增后，电泳分离PCR产物。杂合子 扩增产物为两条长度不等的片段，纯合子为一条片段。 Amp-FLP分析技术充分发挥了PCR技术的高灵敏度和串联重 复序列高多态性的优势，在检测灵敏度、准确性、技术程序 上比RFLP优越，使DNA分析实现了高效、灵敏、准确的 目标。在工作中应用更多的是短串联重复序列（short tandem repeats，STR）分型。 STR基因座的特点 STR是广泛存在于人类
、基因组中的一类 具有长度多态性的DNA序列。基序由2-6个碱基对构成，呈串 联重复排列，主要由基序拷贝数目的变化产生长度多态性。 一般认为，人类基因组平均每6-10 kb就有一个STR基因座，为 个人识别和亲子鉴定提供了高信息基因座的丰富来源。 3、DNA长度多态技术的比较 DNA指纹的高度个体特异性克服了传 统遗传标记鉴别能力低的缺陷，使 个人识别和亲子鉴定实现了从仅能 排除到高概率认定的飞跃，被誉为 遗传分析的里程碑。尽管取得了重大突 破，但DNA指纹在遗传学实践中确 实有一些局限性。例如，检测灵敏度低， 需要相对较大数量的细胞材料。更大的 问题还在于DNA指纹自身无法
、克服的缺 陷： 1无法确定的等位基因，无法统计等位基 因频率。 2对任何一条带，无法确定是由纯合子或 杂合子产生。 3无法确定每条带所代表的基因座及染色 体定位。 4无法确定各基因座之间的独立性。 尽管DNA指纹被认为可以代表个体特 异性的独一无二的条带模式，接近于经 典的指纹。但是，它不易进行常规的统 计学分析和构建计算机数据库，这阻碍 了它在法庭中的应用。许多国家的 鉴定已不再使用多基因座探针为心的 DNA指纹技术。当前，大多数国家采用 了以单基因座多态性为基础的DNA分析 技术，包括Amp-FLP和DNA纹印。 不同 DNA 长度多态技术的优缺点比较 Amp-FLP(如 STR)
20、DNA 纹印 DNA 指纹 00550ng 更多两条带 分辨明确 01-1 kb 可分析严重降解检材 可分析混合斑 概率计算以基因频率为依据 要达到极高个体识别能力需 同时检测多个基因座 引物有种属特异性 引物退火条件严格 多聚酶错掺率 1、但不影 响长度多态分析 1050 ng 更多两条带 分辨明确 0.54 kb 可分析部分降解检材 可分析混合斑 概率计算以基因频率为依据 要达到极高个体识别能力需同 时检测多个基因座 探针有种属特异性 杂交条件严格 配对精确 5001 000 ng 条带以上 有些分辨困难 4kb 以上 降解到 4kb 以下不能分 析 混合斑分析困难 概率计算不是根据
21、基 因频率，因为不能确定基 因座个体识别能力极高 探针与人和动物广泛 交叉反应杂交条件不严格 错配率 3040 （二）DNA序列多态性 DNA序列多态性（sequence polymorphism）的 形成与DNA碱基长度无关，主要与DNA某位点一个 或多个苷酸在不同个体中变异有关。DNA序列多 态性有时采用测序法直接检测各个位点的碱基差 异，比如线粒体DNA测序，有时采用间接方法检验， 比如HLA DQa采用特异性探针杂交法，ABO基因型 则采用酶切ABO等位基因扩增产物，由于酶切产物 碱基长度不同而间接的显示由于碱基变异而引起 的DNA序列多态性。HLA、PM、ABO、MN、酶基 因型、
22、血清型及线粒体测序等，均为DNA序列多态 性。 DNA长度多态性及序列多态性二种分类法，较全 面的概括了 所有DNA多态性检验内容。 （三）线粒体DNA 线粒体是含有染色体外基因组的小细胞器。 它的基因组独立于基因组，呈母系遗传。线 粒体DNA(mtDNA)为环状DNA，有16569碱基对， 含37个编码氧化磷酸化过程相关物质的基因， 还有一个复制控制称为D环。该在个 体间呈现多态性，可用于人类个体识别。 人类mtDNA在英国剑桥Sanger实验首次完 成了全序列测定。这个更初测定的序列(基因库 编码：M63933)作为比对的参考序列，通常被 称为Anderson序列或剑桥序列。 在
24、NA分析使学检验实现了从只能否定嫌疑 人到可以肯定嫌疑人的飞跃。这里，“否定”与“肯 定”涉及到评估个人识别的科学证据意义，而这 类评估至少需要考虑遗传标记的系统效能和遗传标记 对于具体个案的鉴定能力两方面因素。 1、遗传标记个人识别的系统效能 遗传标记的多态性程度越高，应用该遗传标 记进行学个人识别的效能就越高。系统效能 可用个人识别能力（discrimination power，DP)定 量评价。个人识别能力指从群体中随机抽取两名 个体，其遗传标记表型不相同的概率。 2、遗传标记对具体个案的鉴定能力。 DNA遗传标记的系统效能更多地是针对选择 遗传标记而言的。对于具体个案鉴定，
25、学专 家通过使样本的一系列表型组成一个稀有现象的 策略来提供科学证据。 个人识别通过比较两个样本的一系列表型，从 而判断两个样本是否来自同一个体。检测的基因座 数越多且型别一致，证据的作用越大。例如，谋杀 案中，现场血痕与嫌疑人个STR表型相同。以频 率来估计概率，这种表型组合在群体中的稀有程度 可由表型频率按照乘法定律求得(见表)。 虽然血痕既可能是嫌疑人留下的，也可能是其 他人留下的。我们可以评估在其他人中发现这种表 型组合的概率。 表表 -6 个个 STR 特定表型组合在群体中出现的概率特定表型组合在群体中出现的概率 遗传标记现场血痕 STRI 表型嫌疑人 STR 表型
26、表型频率 P群体中存在该表型组合的概率（IIP） TYOX D3S58 FCA D5S8 CSFlPO D7S820 D8S19 TH01 VWA DS3 D16S539 DS51 D21S11 811 16 2223 112 1112 1112 14 79 14 8 一 11 911 14 2931 811 16 2223 1l 一 12 1112 1112 14 79 14 811 911 14 2931 0323 0242 0103 04 00 0143 0075 0294 01 0105 0144 0086 0092
27、0.323 0.078 0.008 0.001 2 0.000 23 0.000 033 0.000 002 5 0.000 000 074 0.000 000 009 7 0.000 000 001 0 0.000 000 000 1 0.000 000 000 01 0.000 000 000 001 在同一性鉴定中，统计学更倾向用似然率 (Likelihood，LR)来评估遗传分析提供的证据强度。 似然率基于两个表型组合来自同一个体的设衡 量证据的强度。例如，现场血痕DNA和嫌疑人血 液DNA表型组合均为X，可以考虑两种设：现 场血痕是嫌疑人所留(原告设)；现场血痕是一 个与案
31、库。 国内虽未就建设DNA数据库立法，但近年来已在 DNA数据库的建立方面进行了一些有益的探索。 2、混合样品检验 迄今为至，多人份样品混合后确定各 个个体基因型，仍为DNA检验的难 题，随着DNA检验技术的发展，是否可 通过定量分析峰面积、测序等技术来 别不同个体的等位基因，国外已有人探 索，相信不久将来会解决这一问题。 3、DNA芯片技术在检验中的开发应用 把检验多个不同的多态性位点的多种探针固 定于特殊载体上，当检材中DNA与该载体上探 针分子杂交时，由于不同位点DNA可与相对应 的探针同时特异性杂交，一次检验可以得到多 个DNA位点多态性结果。由于固定DNA探针的 特殊载体很
32、小且附着很多种不同探针，似计算 机芯片，装载有无穷信息，所以叫做DNA芯片 (DNAchip)技术，又叫基因芯片(Genechip)技术。 随着DNA芯片技术在检验中的开发应用， 相信能使DNA检验上一个新台阶。 4、人类基因组计划对DNA检验的影响 人类基因组计划就是要测定人基因组中所有3109bp碱基 序列，一般有4个步骤：(1)确立基因在染色体上的排列，建 立遗传图谱；(2)用限制性内切酶切割目的基因，获得物理 图谱；(3)测序；(4)综合分析结果，构成完整人基因组碱基 序列。随着人类基因组计划的完成，可能会找到多态性程 度更高的DNA片段，使DNA种属检验、个体识别及亲
33、子 鉴定等翻开新的一页。 5、酶型血清型检验 蛋白质水平多态酶型及血清型检验在传统检验中 发挥了重要作用，随着DNA研究的深入，目前在DNA水平上 可进行多种多态酶及血清型检验，包括GPT、PGM1、EsD、 ADA、GLOI及Rh、C3、C6、Tf等，克服了蛋白质容易变性失 活等缺点，延长了检验时间，并且节约检材。 DNA分型的任务是为侦察罪犯、审理案件 提供科学证据。学应用的DNA长度多态性主要 指串联重复序列，结构特征为基序呈串联重复排 列。按基序长短及产生多态性的机制，可以简单 分为小卫星DNA和微卫星DNA。应用更多的是 STR分型。序列多态性是指DNA分子中某位
34、置上碱 基排列的个体差异。使用的序列多态性目前 更主要的是线粒体DNA序列分析。对DNA个人 识别证据的评估，至少需要考虑遗传标记系统的 效能和具体案件的鉴定结果，给法庭提供一个量 化的科学证据。应该强调的是，如果只简单地做 少数几个DNA遗传标记，鉴定所提供的证据强度是 有限的，而联合使用多个DNA遗传标记，可提高证 据强度。 亲子鉴定亲子鉴定 亲子鉴定(parentage testind)是应用 遗传标记，根据遗传规律对被控父母与 子女血缘关系的鉴定。 涉及父母与子女关系的亲权纠纷 (disputed parentage)可见于：私生子， 女方指控某男子是孩子的生父；已婚 夫妇，丈
35、夫怀疑孩子非他所生；怀疑 调错婴儿；失散儿童及失散亲属 的确认；超生子女的血缘鉴定；财 产继承纠纷；出国案件的血缘鉴定； 拐儿童案；致孕案，嫌疑人 否认他涉案时。 用于鉴定亲子关系的遗传标记，应 该是一种简单的遗传性状，遗传方式已 被确定，具有遗传多态性，更少见基因 的频率一般大于0.01、具有比较高的排除 亲子关系能力。在出生时，该遗传标记 已完全表现，并且终生不变，不受年龄、 疾及其他环境因素的影响。 检测遗传标记需用标准化方法，标 准化方法的必备条件为：基因座定义 和具有的特征已有文献报道。 种属特 异性、灵敏性、稳定性研究已实施。 有可供使用的群体遗传数据。群体遗传 数据包
36、括从有关人群中获得的该基因座 等位基因频率和单倍型频率。用于亲 子鉴定的实验方法与用于群体遗传数据 分析的实验方法完全相同。 目前可接受的标准实验方法有：红细 胞血型、白细胞血型、红细胞酶型、血 清型、单基因座探针限制性片段长度多 态性(DNA纹印)及单基因座扩增片段长度 多态性，包括用聚合酶链反应(PCR) 检测 的可变数目串联重复多态性(VNTR)和短 串联重复多态性(STR)。其他实验方法对 于亲子关系鉴定可能也有效，可作为补 充实验，例如多基因座探针限制性片段 长度多态性(DNA指纹)，但不能代替标准 化实验方法。 一、亲子鉴定基本原理 1遗传学三定律 孟德尔是现代遗传学的奠基人，遗传
37、 学三定律中有两个为其本人研究发现， 个定律由摩尔根发现。这三个遗传 学定律是DNA个体识别及亲子鉴定 总的理论基础。 孟德尔定律分离律 孟德尔说，配子结合发育成的个体，含 有成对的因子(等位基因)，每一对因子可以是 相同的，也可以是不同的。如果相同，则这一 对因子就是纯合子(homozygote)，如果不同， 就是杂合子(hetemzygote)。在形成配子时，一 对基因相互分离，各到不同配子中去，每个配 子只有该等位基因中的一个基因，在受精时， 不同配子间的两个等位基因又以同等机会互相 结合，形成合子。人们将孟德尔提出的这个重 要原理称为分离律(1awofsegregatio
38、n)。 根据孟德尔分离律，表现为显性性状的个体， 有可能是纯合子(AA)，有可能是杂合子(Aa)， 虽其表现型(phenotype)均相同(同为显性)，但 基因型(genotype)不同，分别为AA、Aa。分离 律主要阐述等位基因之间的遗传规律。 孟德尔第二定律自由组合律 孟德尔的实验表明，非等位基因在配子形成 时可以自由组合到不同生殖细胞中，人们将这 条法则称为孟德尔第二定律，即自由组合律 (1awof independent assortment)。自由组合律 主要阐述不同染色体之间基因的自由组合规律。 、连锁和交换定律 现代研究表明，孟德尔自由组合律适合于分 布在不同染色体上的基因，对于
39、位于同一条染 色体上相距较近的非等位基因，则不能适用。 摩尔根等提出了连锁和交换定律。同一条染 色体上的遗传因子连在一起一同遗传的现象， 称为连锁（linkage），二个同源染色体上遗传 因子的相互交换，称为交换（crossing over）。 同一条染色体上不同基因是否有连锁关系，与 基因间距离大小有关，距离越近，越不易交换， 越具有连锁关系。 亲子鉴定的基本原理有以下两点： 在肯定孩子的某个等位基因是来自生 父，而被控父亲(alleged father, AF)并不带 有这个基因的情况下，可以排除他是孩 子的生父。显然，检查的遗传标记越多， 非生物学父亲被排除的概率就越大。 在肯定孩子的某
40、些等位基因是来自生 父，而被控父亲也带有这些基因的情况 下，不能排除他是孩子的生父。这时可 以计算如果判断他是孩子生父，理论上 的把握度究竟有多大。 在一个双等位基因遗传标记系统中，排除 和不排除亲子关系的各种格局如表所示。在一 个家庭中，血型的遗传规律可概括为：孩子 不可能带有双亲均无的等位基因；孩子必定 得到双亲每方的一对等位基因中的一个；除 了在双亲都带有相同基因(如A)的情况下，孩子 不可能带有两个相同基因(AA)；某个基因在 双亲中的一方或双方为纯合子时(AA)，必定要 在孩子中表现出来(A)。双等位基因遗传标记系 统亲子鉴定的基本原理可以推广用于多个等位 基因的遗传标记。如STR系
41、统。 排除和不排除亲子关系的格局 母亲 AA AA Aa Aa Aa Aa aa 孩子 AA Aa A A Aa aa Aa aa 被控父亲 AA 或 Aa Aa 或 aa AA 或 Aa AA 或 Aa 或 aa Aa 或 aa AA 或 Aa Aa 或 aa 不排除亲子关系 被控父亲 Aa AA Aa _ AA Aa AA 排除亲子关系 二、否定父权 排除亲子关系可以归纳为如下两种情况： 孩子带有母亲和被控父亲双方都没有的一 个基因，孩子没有被控父亲必定要传递给其 后代的一个基因。 在大多数的亲子鉴定案例中，一般已知母亲 是孩子的生母，问题是要鉴定父亲是否为孩子 的生父。如果母亲不带有孩子
42、的某些基因，那 么可推断这些基因一定来自生父。根据遗传规 律，排除父子关系有四种类型(见表l)前两类被 称为直接排除；后两类是根据阴性反应结果检 出纯合子，被称为间接排除。 排除父子关系的类型 类 型 直接排除 间接排除 母亲 1 VWA 2 D20S16l 3 Rh(E+) 4 MN 孩 子 VWA 14 一 D20S161 EE N 被控父亲 VWA 16 D20S161 20 Rh(E 一) MM 1、错误否定父权的危险性 测试的遗传标记增多，遇到遗传变异的可能 性也增加。遗传变异使亲子之间的遗传关系呈 现为不符合遗传规律。如果缺乏这方面的知识
43、， 容易错误否定父权。遗传变异主要有：沉默基 因、替代等位基因、基因缺失、血型变异、基 因互换、基因突变、弱抗原、嵌合体、镶嵌抗 原、生理与理性变异等。尽管遇到遗传变异 概率很低，为了避免潜在遗传变异的影响，亲 权鉴定须由专注技术人员严格把关，排除父权 至少应根据两个以上遗传标记。 2、非父排除概率 非父排除概率指不是小孩生父的男子能被遗传 标记排除的概率。不是小孩生父的男子被误控为生 父时，理论上可以根据遗传标记检测予以否定。但 在遗传标记的鉴别能力较差时，无血缘关系的男子 与小孩的遗传标记偶然也会符合遗传规律，因而不 能否定他与孩子有亲子关系。例如，单独使用一个 血型时，有时不能提供排除
44、的信息。设母亲和孩 子都为B型，则A，B，O和AB四种表型的男子，都有 可能是孩子的生父。为此需要检查更多的遗传标记。 对孩子的生父来说，不论检查多少遗传标记，都不 可能找到排除他与孩子有亲子关系的证据；而对于 不是孩子生父的男子，随着检测遗传标记的增加， 他被排除的概率就越大。 不同遗传标记多态性程度高低不同， 无关男子因偶然机会不能被排除的概率 也有高有低，因此有必要知道不是小孩 生父而被控为生父的男子，应用某一种 遗传标记检测有多大的可能性能被排除 父权。这就是通常所说的父权排除概率 (excluding probabili-ty of paternity, EP),确 切地说是非父排
45、除概率，它是衡量遗传 标记系统在亲子鉴定中实用价值大小的 客观指标。 3、排除概率计算原理 排除概率的大小取决于遗传方式和群 体基因频率。现以MN血型为例说明排除 概率的计算原理。设M和N基因频率分别 为p和q，在HardyWeinberg平衡状态下， 群体中基因频率和基因型频率保持世代 不变，下列表达式反映了群体中基因频 率和基因型频率的数学关系。 (p+q)2=p2+2pq+q2 母亲表型 频率 孩子表型 相对概率 可排除非父表型 相对概率 排除概率 M p2 M P N q2 P3q2 P2 MN Q M P2 P4q N q2 N Q M P2 P2q3 q2 MN P N q2 Pq
46、4 MN 2pq M P/2 N q2 P2q3 2pq N P/2 M P2 P3q2 MN 血型系统的排除概率合计 Pq(1-pq) 纯合子基因型频率=p2或q2 杂合子基因型频率=2pq 对于共显性的MN血型，表型M，N和MN的频 率分别也为p2、q2和2pq依据母和子表型的各种可 能组合频率，算得每种组合中孩子表型的相对比 例，以及被排除的非父亲的表型频率，可求得 MN血型系统的排除概率为Pq(1-pq)，具体计算见 上表。 排除概率依据遗传标记系统的基因中，是否 为显隐性或共显性遗传方式有不同的计算方法。 按上述MN血型的计算原理，可以写出各种遗传 方式的遗传标记计算排除概率的公式。
47、 、一个显性和一个隐性基因组成的系统 设显性基因频率为p，隐性基因频率为q，则 排除概率为： EP=Pq4 、两个显性和一个隐性基因组成的系统 设两个显性基因频率分别为p和q，隐性基因 频率为，则排除概率为： EP-p(1-p)4、+q(1-q)4+2pqr2+pq(p+q)r2 、共显性基因的排除概率 设两个显性基 因频率分别为p和q，则排除概率为： EP=pq(1-pq) 、复等位共显性基因的排除概率 目前 常用的DNA遗传标记，如STR一个基因座 有多个等位基因，并且均为显性。设Pi代 表群体中第i个等位基因频率，Pj代表群 体中第j个等位基因频率，并且等位基因i 不等于等位基因j，则排
48、除概率为： 累积排除概率 上述各种计算非父排除概率的公式是对于某一个 基因座而言的。既然亲权鉴定不止使用一个基因 座，那就有必要知道使用的全部遗传标记。对于 不是小孩生父的男子，否定父权有多大的可能性， 即总的累积 非父排除概率。累积排除概率计算公式为： EP=1-(1-EP1)(1-EP2)(1-EP3)(1-EPk) =1-II(1-EPk) 式中EPk为第k个遗传标记的EP值。检查多种遗 传标记，按各种遗传标记的遗传方式求出EP值后， 再按公式求出总的EP值。下表以成都汉族群体为 例，给出了CODIS系统全部个STR基因座的累积 排除概率计算实例。 提示理论上如果随机抽取100个由母
49、亲、 孩子及非生物学父亲构成的三联体， D8S19将排除68.5的非生物学父亲； 而TH01可排除326的非生物学父亲。 说明非父排除概率越高，遗传标记排除 非生物学父亲的能力就越强。 同样，所用遗传标记数目越多，累积 非父排除概率愈高，鉴别能力愈强。 三、肯定父权 当被控父亲具有生父必具的遗传标记，则不 能被否定。这种情况下，被控父亲可能是生父， 也可能是被错误指控的随机男子。显然，若被 控父亲不能被否定为孩子的生父，应计算被控 父亲的亲子关系概率(oaternity probability)。 Essen-MOiler提供了一个计算方法。该方法是 根据母亲、孩子和被控父亲三者的表型计算亲 子关系概率。具体步骤是根据母、子联合遗传 类型，比较被控父亲与随机男子成为孩子生父 的概率，先计算出父权指数，然后再计算父权 相对机会。 1、父权指数 父权指数(paternity index，P1)是判断亲子关系所 需的两个概率的似然比，即具有被控父亲遗传表型 的男子是孩子生物学父亲的概率(均与随机男子是孩 子生物父亲的概率（Y）的比值。简言之，PI代表被 控父亲具备必需基因成为生父的概率比随机男子具 务必需基因成为生父的概率大多少倍，由下列公式 表示： 式中：PI=X/Y=c x f/gxf X（具有被控父亲遗传表型的男子是孩子生物学父亲 的概
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2023-12-25
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