检测
dna
的方法有几种
检测
DNA
的方法有多种，包括
基因测序技术：通过测定
DNA
序列来确定
DNA
中的碱基顺序。
2、 PCR
（聚合酶链式反应）
：通过扩增特定的
DNA
片段来检测
DNA
凝胶电泳：
将
DNA
样品分离成不同大小的片段，
然后通过凝胶胶体进行分离
和可视化。
4、
化学法：使用特殊染料或化学试剂来检测
DNA
的存在或特定的
DNA
序列。
5、
核磁共振（
NMR
）
：通过检测
DNA
中的核磁共振信来确定
DNA
的结构。
6、
电子显微镜：通过观察
DNA
的形态和结构来检测
DNA
7、
免疫学方法：利用抗体来检测
DNA
或特定的
DNA
序列。
这些方法在科学研究、医学诊断、法庭审判和亲子鉴定等领域都得到广泛应用。
dna 亲子鉴定用什么检测方法
在医学不是那么发达的年代，如果想要做亲子鉴定，一般都是通过血液鉴定。但是现在的亲子鉴定技术不断的，有了很多鉴定的方式，主要分为隐私鉴定和有创鉴定。那么，我们一起来看看，做亲子鉴定都有哪些方法呢?
做亲子鉴定都有哪些方法
1、通过血型测试(传统的亲子检测方法)。小孩六个月大就可以做了，需大量的血液样本。方法检测过于繁琐、取样苦且错误率比较高。传统的血型判断有一定程度上的效果,但亲子鉴定正规来说不能以血型测试来做参照。
2、SNP检测。当前DNA亲子鉴定利用人类基因重复碱基序列和PCR技术进行个体识别，，将来的SNP是代分子标记技术是方向，成本费用偏高。
如果想预约做亲子鉴定的话，首先您要有一定的心理准备，比如说孩子是你的或者孩子不是你的，这都是你应该面对的，所以做亲子鉴定之前一定要想好了才可以做，然后就可以找一家相对正规的亲子鉴定机构来做亲子鉴定就可以了。
怀着孕能做亲子鉴定吗
1 。胎儿亲子鉴定的程序并不复杂。一般程序是预约-识别-取样-识别-报告反馈。应注意隐私亲子鉴定活检应通过下阴道进行，白带应清洁，否则容易引起宫内感染;还需要检查血液常规测试。
做dna亲子鉴定用什么方法
亲子鉴定，是指运用生物学、遗传学以及有关学科的理论和技术，根据遗传性状在子代和亲代之间的遗传规律，判断被控的父母和子女之间是否亲生关系的鉴定。涉及的案件包括：非婚生子女的抚养纠纷、财产继承纠纷、产房调错新生儿导致的亲生子认定，以及被拐和失散子女的认领等。亲子鉴定主要以人的血型和血型以外的单纯遗传性状的遗传规律为基础，遗传性状是由位于细胞核内染色体上的基因所控制的，并通过亲代与子代间基因的传递将个体特征遗传给子代。基因的传递遵循一定的规律。
（1）子代基因都来自亲代，一半来自父亲，一半来自母亲。
（2）除非亲代一方（或双方）有某一基因，否则子代不会有该基因。
dna亲子鉴定费用是多少
办理亲子鉴定的流程如下：
(注：可用于个人亲子鉴定的样本有常规样本：血痕、特殊样本：带毛襄的头发、口腔棉签、精斑、混合斑(带有女方的物质)、经血、烟头、牙刷、口香糖等。)
亲子鉴定用什么血细胞
因为每个人的dna系列是完全不一样的，所以在进行亲子鉴定的时候使用dna这种判定方法是比较准确的，而大部分朋友对它都并不了解，那么你知道dna亲子鉴定用什么血细胞吗？下面我们就带着这个疑问跟着我一起来看看问题的正确答案吧。
dna亲子鉴定用什么血细胞
一般都是采用红细胞检查就可以了。DNA亲子鉴定就是利用医学、生物学和遗传学的理论和技术，从子代和亲代的形态构造或生理机能方面的相似特点，分析遗传特征，判断父母与子女之间是否是亲生关系。通常DNA亲子鉴定适用于认子（亲）相关的家族亲缘鉴定案例，如失散多年的父母子女等的认亲，这对于满足相关家庭的亲情需求起着至关重要的作用。DNA亲子鉴定，是利用医学、生物学和遗传学的理论和技术，从子代和亲代的形态构造或生理机能方面的相似特点分析遗传特征，判断父母与子女之间是否是亲生关系。
孩子几岁可以做DNA亲子鉴定
孩子出生之后进行的DNA亲子鉴定，样本可以为：口腔拭子、血液、带毛囊毛发、口香糖、烟蒂、牙刷、精液（斑）、指甲等样本。委托人可以根据实际情况，以及所需鉴定的类型，选择适合的样本送检。
一般情况下不建议6周岁以下的孩子使用头发做DNA鉴定，因为孩子太小，头发毛囊发育不全，很可能不能提取足够的DNA，所以不建议使用头发做鉴定。对于小孩子我们建议使用口腔拭子作为DNA亲子鉴定的检材。因为口腔粘膜是专针对DNA检测的，和抽血没有任何别，两者的DNA鉴定结果完全一致的。不管口腔中的细胞还是血液中的白细胞是一样的。通过擦拭口腔来采集口腔粘膜上皮细胞，与抽血采样相比口腔粘膜简便而且隐私伤性，无痛。小孩在任何情况下都可以采集，不分年龄限制。
dna 亲子鉴定用什么检测方法准确
1、血型测试
用于血型来鉴定亲子关系的血型系统主要有：AB型血、A型血、B型血、O型血、检验的血型系统越多，其准确性就越高，如果血型检验的结果表示无遗传关系，可作出否定亲子关系的另外，但结果存在遗传关系也不能完全确定是亲子关系。
2、染色体多态性鉴定
3、DNA鉴定
有隐私亲子鉴定技术吗
生的生活方式等变化，导致许多夫妻结婚后都担心孩子不是自已的，大部分是丈夫怀疑孩子不是亲生，还有的是怀孕前不止与一个人有过性关系的女性，她们为了搞清孩子的亲生父亲是谁，怀着孕就提出鉴定。
隐私亲子鉴定是通过孕妇外周血中游离的cfDNA作为鉴定样本进行的母血分型检测，是准确的。
基因检测，这是个无数友都必须直面的名词。
今天，大家就跟着小编来看看这些靠谱的解答，希望能帮助大家更好地做选择！
基因检测是什么？
首先，让我们来看看专家怎么说。
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基因检测是一种实验生物学检测技术，可以通过血液、唾液、其他体液、或细胞对DNA进行检测。它可以在疾的临床症状未发生之前进行早期诊断，为临床疾尤其是致死性疾的预防和治疗提供了有利的条件。疾易感基因检测如同一本个人健康说明书，它告诉我们生命该如何正确使用。
人的DNA是遗传物质的载体，而基因就是DNA中真正有含义的片段。癌友之所以会得肿瘤，归根结底是由于身体内累积了许多有害的基因突变，千奇百怪的变异，更终导致了癌症。基因检测就根据基因检测的结果再选择哪一种化疗药物或分子靶向治疗药物，从而实现肺癌的个性化治疗。
基因是生命体的遗传物质。癌细胞中不少基因是变异的：有的基因缺失了，有的基因重复了，有的基因长错地方了，导致了肿瘤细胞的异常增长，我们通过各种现代检测方法，把这些变异的基因找出来，仔细分析，可以协助临床诊断、指导治疗选择、辅助监测疾复发和耐药、预估生存期等。
癌症患者一定要做基因检测吗？
广义上讲，所有肿瘤患者均可以接受基因检测；狭义上讲，根据指南推荐，不同的种、不同的分期、出于不同的目的，不同的患者，适合做不同的基因检测。
比如，一个晚期肺腺癌患者，尚未接受任何治疗，家庭经济情况一般，只是为了看看，是否有合适的已经在内地上的靶向药可用，那么只要测一下更常见的那几个基因就可以了。
比如，一个超级土豪，是一个肉瘤，其他药物治疗都失败了，但是依然想碰碰运气，看看是不是自己还有靶向药可用：不管是已经上还是处于临床试验研究阶段的，不管是国内还是国外，都想知道。那么，他或许可以选择做一下跨癌种的、尽可能多的、几十上百甚至全部的基因。
但是，在癌症的治疗过程当中，有一部分人在接受靶向治疗前，选择不做基因检测，而这种治疗方法就叫做盲试。对比基因检测，盲试也有自己的优势，比如即能省钱又能节省时间。那么到底什么情况才可以跳过基因检测，直接进行靶向治疗呢？
1、靶向药单一
一些种类的癌症，可能突变类型比较单一，对于靶向药也没有可选余地，这种情况下，可以选择盲试，一旦发现没有效果，就需要更他疗法。
2、生存期不乐观：
对于一些癌友，可能的预估不足6个月，并且经济条件也不好，这种情况，如果拿半个月等一个不确定的结果的话，就显得太冒险，所以不如直接进行盲试，把钱用在刀刃上，挑选概率更大的进行尝试，俗称“闯大运”。
当然盲试也有着自己的短板，在没有基因检测之前，用药基本靠“猜”，而效果也基本靠“祈祷”，所以在治疗的过程中，对于是否进行靶向治疗，大家可以在主治或全球肿瘤网后慎重决定。
是不是所有靶向药，都要做基因检测？
当然不是。有些抗血管生成为主的靶向药，目前并不知道，哪个或者哪几个基因变异，与这些药物的疗效有相关性。比如：索拉非尼、阿帕替尼、舒尼替尼、贝伐珠单抗等靶向药，并不一定需要做基因检测。
基因检测，选择什么标本更合适？
做基因检测，是检测肿瘤细胞的突变，因此需要获取肿瘤细胞。
临床上通常有三种方式：
1、术中肿瘤样品
肺癌手术中（或胸水中）得到肿瘤样品。
2、穿刺活检样品
通常是在局部麻醉下，使用很细的针刺入疑似肿瘤，来获取少量细胞用于分析。这样创伤很小，可以避免不必要的手术，对患者影响小。
3、“液体活检”。
肺癌的液体活检，主要是指通过分析血液里的癌细胞或者癌细胞释放的DNA进行分析，判断癌症突变类型。这之所以能成功，是因为晚期癌细胞，或者癌细胞的DNA，会经常跑到血液里面，现代技术有可能把它们捕获，进行分析。
“液体活检”是目前更热门的技术之一，更大的优点是隐私，风险小，而且可以反复多次取样，但目前依然以组织理切片的基因检测，准确度更高，是业内公认的金标准。虽然它也不是1%完美（比如还有空间、时间、异质性的问题）。
但是，常常能遇到友无法取得足够的组织，或者组织标本年代久远，这类情况下，也可以考虑用血液标本勉强代替。
我们一般推荐的优劣顺序是：
更近手术或活检新取的组织标本>1-2年内的组织标本>更新的血标本>2年以上的旧的组织标本。
基因检测有很多方法，这些方法可信吗？会不会存在误差？
任何一种生物学检测方法，准确率都不可能达到1%。但是，目前、国内共识中推荐使用的基因检测方法，都是经过大量实验数据验证和临床评估的，都能很好地表现肿瘤的基因状态。
所以，虽然不同的基因检测方法敏感性、特异性之间稍有差别，但总体而言，只要是通过了国家官方认证的检测技术，都可以使用。
血液基因突变动态监测，有什么用？
血液中基因突变的浓度变化，很大程度上可以反映情的变化，甚至有时候比影像学更提前，比肿瘤标志物更准确。那么利用血液基因检测，通过基因突变的浓度变化和性质改变，可以提前发现疾复发、提前预警药物耐药等。
治疗一段时间后，要不要重新做基因检测？
我们一般仅推荐接受了靶向治疗的友，在药物耐药、疾进展以后，酌情考虑再次行基因检测——因为靶向药用了一段时间以后，耐药了，有一部分人会富集出有更新的靶向药可用的新的突变。
想用PD-1抑制剂，为何也要做基因检测？
（1）肿瘤突变负荷（TMB）高的患者，PD-1抑制剂的有效率更高，生存期更长，更适合接受PD-1治疗。因此，在接受PD-1抑制剂治疗前，做一些TMB的检测，意义重大。
（2）携带JAK1、JAK2、BM2、HLA、STK11等基因突变的患者，可能对PD-1抑制剂天然耐药，所以要提前检测一下。
（3）携带EGFR突变、MDM2扩增的友，使用PD-1抑制剂，可能发生爆发进展，所以也要提前检测一下。
（4）携带PBRM1、POLE基因突变的患者，使用PD-1抑制剂，疗效很好。有时候，也可以测一下碰一碰运气。
1、 引物纯化方式有哪些，如何选择？
C柱脱盐：这是一种活性碳柱子，有人称其为简易反相柱，它对DNA有特异性的吸附，DNA可以被有机溶液洗脱，但不会被水洗脱，所以能有效地去除盐分。但是它不能有效去除比目的片段短的小片段。
OPC：合成DNA寡核苷酸片段(Oligo)的更终产物上带有DMT。OPC纯化就是基于DMT与树脂的亲合力。Oligo上只有更后一个碱基带有DMT，其它碱基的DMT基团在逐步的合成过程中已被去除。因此，原则上只有真正所要合成的DNA片段末端有DMT，而短片段杂质末端无DMT。
OPC柱中装有对DMT具有亲和力的树脂，所有合成产物吸附在OPC柱上以后，用稀的有机溶剂洗柱，带有DMT的片段吸附能力强，不易被洗脱，不带有DMT的片段吸附能力弱，被洗脱。然后用三氟乙酸TFA脱去DMT基团，再用浓一点的有机溶剂洗脱DNA。这种方法的优点是快速，简易。但是其专一性吸附DMT能力有限，不免仍然有短片段带入的可能，特别是对长碱基的纯化效果不一定理想。长片段建议使用PAGE纯化。
PAGE：它是依据DNA片段在变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时的迁移率不同来分离大小片段的。由于各分子所带电荷和大小不同，综合影响其在凝胶中的迁移速度，大片段迁移得慢，经过一定时间的电泳，大小片段会分开，然后停止电泳，剥离凝胶，置于荧光TLC板上在紫外灯下切割目的条带，浸泡碎胶，并从泡胶的盐溶液中回收目的DNA。优点是纯化效果很好、尤其是纯化长链效果更好、而且是可以直观看见DNA片段合成情况的质控环节。缺点是费人工、电泳及后处理过程中样品损失量大。
2、需要什么级别的引物？
3、 需要合成多少OD数?
根据实验目的确定。一般PCR扩增，2OD引物，可以做-5次5ul标准PCR反应。如果是做基因拼接或退火后做连接，1OD就足够了。但是有些研究人员，就做几次PCR，却要5-1OD。做全基因构建的引物都比较长，但是我们有些研究人员也要求高OD数。片段越长，更后全长得率就越低，割胶越多，出错的几率就越大。超出需要之外的OD数要求，其实也是对社会资源的一种浪费，同时也从一个侧面反映了部分研究人员，特别是新手的自信心不足。引物用量过大，容易引起非特异性扩增。
4、 投诉定量不准是怎么回事儿？
可能存在如：定量错误，分装问题，系统误差等（1%左右是允许的）现象，而客户投诉的大部分原因是：因为没有能够正确理解引物OD数的含义，没有能够正确使用分光光度计，特别是使用微量测定；用户没有将OD读数，正确地转换成母液中OD数。这种情况比较常见。例如：验证标有2OD引物的简单做法是：加入1ml水，彻底溶解混匀后，取1ul,加入装有9ul水，光径为1cm的石英比色皿中操作方法好象不对，波长26nm,此时光吸收的读数为.2、其他情况如用户收到引物干粉时，打开引物管盖前没有离心或其他误操作导致引物干粉部分丢失。
5、 如何计算引物的浓度？
引物保存在高浓度的状况下比较稳定。引物一般配制成5-1pmol/ul。溶解前您需要核对合成报告单和引物标签上的引物OD数是否一致。如果不一致，请和我们联系。我们可以根据生产记录查到实际产量是多少。一般情况下，我们建议将引物的浓度配制成1umol/L，加水的体积（微升）按下列方式计算：V(微升)=OD数(乘)3(乘)1/(除)引物的分子量。引物的分子量可以从合成报告单上获得。如果需要配制成其他浓度，按上述公式换算。注意：1OD26=3ug/ml
6、 如何计算引物的Tm值？
引物设计软件都可以给出Tm，Tm与引物长度、碱基组成及所使用缓冲液的离子强度有关。长度为25mer以下的引物，Tm的近似计算公式为：Tm=4℃(G+C)+2℃(A+T)对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为：Tm=81.5+16.6xLog1[一价阳离子]+.41(%GC)–6/size公式中，Size=引物长度。
7、 引物(含修饰)的分子量是如何确定的？
MW=(NAWA)+(NCWC)+(NGWG)+(NTWT)+(NmodWmod)＋（NxWx）+(NiWi)+16Ns–62NA,NG,NC,NT,Ni分别为引物中碱基A或G或C或T或I的数量，WA,WC,WG,W,Wi分别为引物中碱基A或G或C或T或I的分子量，Nmod，Wmod分别为修饰基团的数目和分子量对于混合碱基的分子量为混合碱基的分子量总合除以混合数，例如G+A混合的分子量为（1+329.21）/2 =321、Ns为硫代数目，硫代每个位置增加分子量16
8、 Oligo DNA更长可以合成多少个碱基？
以每步反应效率为99%进行计算，粗略计算合成到1bp时，目的DNA片段的比例便为37%。建议合成长度在1mer以内，比较长的的DNA片段，建议在本公司的基因合成部合成。
9、 寡核苷酸一般以何种形式提供？如何溶解？
我们一般以干粉形式提供寡核苷酸，呈白色或无色透明状。建议使用TE buffer溶解，如果实验条件限制，也可以使用双蒸水或者去离子水等不影响后续实验的缓冲液。
1、 寡核苷酸在使用时有哪些问题需要注意？怎样保存？
我们提供的寡核苷酸是干粉形式的，有时会离开管底，因此在次开盖前离心或者将管底朝下在桌子上轻叩几次，将其收集到管子底部。干粉状的DNA在－摄氏度 可以保存1年之久，但溶解后的保存时间要大大缩短。保存时间与所用的水中有无核酸酶、PH值和环境温度等外在条件有密切的关系。我们公司一般默认提供两管引物，建议先将一管配成较高浓度的引物溶液，置于－摄氏度 的保存环境中，可以存放数周，这样可以避免因反复冻融而造成的污染与破坏。
11、 引物溶解后发现有微量沉淀，会影响实验结果吗？
纯化时偶尔会有微量的树脂进入纯化好的产品中，不影响任何反应结果，请稍许离心后取上清使用。
12、 引物检测方法
建议使用分辨率比较高的聚丙烯酰胺凝胶来检测（浓度16%左右）。检测后剥离凝胶，置于荧光TLC板上在紫外灯下观察条带的分布或者亮度。也可以用EB染色后观察，但是EB等染色剂的染色是嵌入DNA的双链之间的，而合成的Oligo DNA是单链，Oligo DNA自身形成的立体结构越复杂，EB的染色就越容易，DNA带也就越亮。相反，有一些Oligo DNA由于不形成高级结构，根本就不为EB所染色，导致条带弱甚至是无条带，可能会出现EB染色后不能观测到或者DNA跑不开，故不建议使用琼脂糖凝胶电泳检测引物纯度与量。
、 已经溶解的引物，为什么原先使用正常，而过一段时间再使用就不好了？
如果您溶解引物的水的PH值过低或污染了菌或核酸酶，会使引物降解。使用时没有充分解冻混匀，液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物，避免反复冻溶。建议使用1mM Tris（pH＝7.5）的缓冲液溶解引物，因为有些蒸馏水的pH值比较低（pH4-5）,引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题，而是PCR使用材料特别是模板的质量与先前使用的不完全一致。
14、 引物是经过PAGE纯化的，为什么还有碱基缺失或插入？
理论上分析型PAGE变性电泳，可以分引物之间一个碱基的差别。但是制备PAGE电泳，上样量都是非常大，电泳时的条带非常宽，带与带之间有重叠，分辨率已下降，电泳后割带回收目的引物时，很难说不割到差别仅几个碱基的引物。
、 一般的合成OligoDNA的5和3末端有磷酸根吗？
没有，5’和3’末端均为羟基。如需要加磷酸末端，订货时请特别注明，需另收取费用。
16、 简并引物使用应该注意什么？
简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物，次黄嘌呤可以同所有的碱基配对，降低引物的退火温度。使用时注意
①不要在引物的3 '端使用简并碱基，更后三个碱基的退火温度足以在错误位点起始PCR
②使用稍高的引物浓度（1uM-3uM），许多简并混合物中的引物不是特异性针对模板的
③简并引物应选用简并程度低的密码子
④3'端不应存简并性，否则可能出现产量低而看不见扩增产物
⑤更好不用来测序
、 PCR产物只有单引物形成的非特异性条带？
引物特异性不好，建议重新设计引物。
、 检测PCR产物时，经常看到下面有很多明显的引物二聚体形成的亮带？
可以通过减少引物的用量或者减少循环次数来避免引物二聚体产生，如果这样做效果还不明显，再考虑引物的问题，说明引物之间容易形成互补的配对结构。
、 引物设计参考
①引物的3’更好是C或者G，或者CG,GC，能促进引物通过G与模板结合。
②设计的引物更好有接近的Tm值
③避免引物3’互补或者自身互补
④避免引物3’有三个G或者C，避免在扩增高CG含量的模板时产生错配引物的退火温度主要是指引物与模板退火的温度，不包括酶切位点
、 引物是我们设计的，现在您扩不出来，我们要负责吗？
不负责任。引物设计好，我们都会发给您确认。设计引物时我们遵循一般的指导原则，由于影响后期实验的因素很多，因此，我们不负责后续续问题，但可以根据客户要求重新设计。
21、 合成的引物进行 PCR 反应时无目的条带，怎么办？
PCR反应失败的原因很多，可以从以下几个方面考虑。
①引物和模板是否配对，同源性有多大？
②引物本身是否有高级结构，或者二条引物之间是否形成高级结构？
③PCR反应所用试剂是否能正常工作？
④PCR仪是否能正常工作？
⑤PCR反应条件是否合适？
如果一切正常，还无法解决问题时，我们会重新检测引物，必要时免费重新合成。
、 PCR扩增有很强的非特异条带，说明引物有污染吗？
扩增目标很弱或没有，非特异性条带很亮，一般是模板污染（如RNA中污染基因组）或扩增条件不合适所致，换模板或者改变扩增条件，如降低退火温度等。如果有主带，还有非特异性条带，需要适当提高退火温度。
、 PCR产物克隆后测序发现引物碱基有错误，或是缺失突变碱基，为什么？
①合成过程中，碱基附加至DNA片段之前，碱基和碱基之间发生了偶联，然后再附加到了DNA片段上，造成多碱基现象。
②合成时碱基G可能会转化成烯醇异构体，此时进行PCR反应时G会转变成A。
③合成过程中的脱嘌呤作用，对脱嘌呤后的碱基DNA聚合酶不能识别，此时可能观察到A或G的缺失。嘌呤含量越高，就越容易发生这种情况。
④不完全的脱保护结果。通常C脱的快，G脱的慢。不完全脱保护会发生碱基缺失。
⑤合成过程中的Capping（盖帽）反应不完全，使短片段DNA继续参与合成，造成碱基缺失。
⑥2,6 diaminopurine , DNA复制和扩增过程中DNA聚合酶将2,6 diaminopurine看作碱基A，测序就会发现碱基G-A置换。
应该说，上述这些情况发生的可能性都极低。合成的DNA链越长，发生这种情况的机率也就越大。多数问题的出现是PCR过程和克隆过程中引入的错误。如果出现这种情况，你可以，重新挑取克隆测序，有可能找到序列正确的克隆。可以要求我们重新免费合成引物 ，我们不承担其他连带责任。
24、 为什么我们的引物重合了几遍都扩增不出来？
如果您怀疑引物的问题，请您首先测定您溶解的引物的OD值，看实验时加入的引物量是否正确。如果量是正常的，请您告诉我们公司您的引物编，我们会复查留存样品。如不明原因，我们免费为您重新合成一次。如果仍然不能扩增，请您查找其它原因，很可能是酶或者条件不够成熟。
OLA技术是通过两步来完成的，先用PCR技术进行扩增，再将PCR产物变性为单链；然后加入两条互补于待测SNP位点一侧序列的等位基因特异性探针和一条互补于待测SNP位点另一侧序列的公共探针，在DNA连接酶的作用下，与目标DNA 单链完全互补的等位基因特异性探针和公共探针发生连接反应。
25、 长链引物为什么出错的几率非常高？
引物合成时，每一步反应效率都不能达到1%，产生碱基插入，缺失，置换突变的因素客观条件都有一直存在。引物链越长，突变的频率累加起来就越高。研究人员总希望合成的引物万无一失，这种心情可以理解。但是犹如PCR扩增，不可能绝对保证扩增产物中没有突变，引物合成也不可能保证1%正确。要知道，引物合成中发生错误（非人为因素）的频率，比任何高保真高温聚合酶PCR扩增过程所产生的频率都要高。做长链引物合成，您要有引物中部分引物可能有突变的思想准备。
26、 PCR扩增不出就引物有问题吗？
基本不是。当今发展的各种的PCR扩增技术，各种的高温聚合酶，就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出，扩增效率低的问题。如巢式PCR就是扩增那些拷贝数很低的基因片段。 有些重复片段的扩增，GC含量高的片段，非要采用特殊扩增手段才能扩增出来。
引物扩增不出，主要是下列两种情况比较常见
①RT-PCR：请注意，很多基因通过常规RT–PCR方法是很难扩增出来的。RT-PCR成功的关键在于RT反应的RNA质量和目标基因在特定组织和细胞中的含量。
②从基因组中扩增：一般情况下，基因在基因组中都是单拷贝，基因组作为模板需要严格控制用量，基因组DNA过高，会影响反应体系中的Mg和pH。
27、 测序发现引物有突变是怎么回事？
测序发现引物域有突变，特别是4个碱基以下的引物,发生的概率不大，但是肯定也会发生。用户一般可以放心，引物序列一般都是通过电脑直接将您的序列COPY到合成仪的，碱基输错的机会不多。我们有一套控制办法，预防碱基输入错误。发生这种突变的原因有很多解释，人们还没有办法彻底解决这个问题。引物合成的固相合成原理都一样，采用的机器也基本相同，合成主要原料都是由少数的几家跨国公司提供的，所有每个合成服务商遇到的问题也基本类似，没有人可以超脱。
引物合成是一种多步骤的化学反应，合成效率更高也就是99%，副产品不可能避免。引物序列中插入突变往往是碱基重复，一般认为，偶联过程中，正在偶联的部分单体发生丢失DMT,导致单体又接了上去，故发生插入同一碱基的突变。至于缺失突变，一般认为是带帽(capping)反应不彻底造成的，Caping反应主要是封闭极少数5'-羟基没有参加反应单体。被封闭的引物，在下一轮偶联时将不能继续参与合成。对于碱基置换的突变，产生的原因一般认为是碱基不能1%脱保护，即引物上可能含有残留保护基团，引物的这些域不能很好地与互补链配对，当扩增的产品被亚克隆转化到大肠杆菌中，可能被细菌中修复系统补上了非配对的碱基。置换突变通常发生在G转换成其它碱基。碱基G在一定条件下可以转化为烯醇异构体(脱嘌呤)，2,6diaminopurine,DNA复制和扩增过程中DNA聚合酶将2,6 diaminopurine看作碱基A，测序就会发现碱基G-A置换。脱嘌呤现象在富含嘌呤的引物中发生的频率较高。脱嘌呤的引物在引物后处理脱保护阶段如果被降解，测序就会发现碱基G或A的缺失。
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2024-01-16
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