一、没在一个地方可以先提取一个人的dna吗

1、中风死亡前兆有哪些

三甲 佛山中 呼吸科

2、如果一个人死的时候如果正在做梦，他会不会一直在梦境里

看到这个题目，忍耐不住，决定先提供一些知识点，让大家讨论；然后写一个自己的亲身经历，更后希望大家也可以自己的故事。

梦境的本质

人类的梦境，按照现代科学界主流的观点，是人类意识（意识与潜意识）的投影。

所以，梦境，归根到底，还是意识，解决了意识是什么的问题，梦境自然就清晰明了。

按照量子力学的核心解释，我们可以得出，意识是组成脑的原子群的一种“组合模式”！我们的意识，完全建筑在我们脑袋的结构模式之上！只要一堆原子按照特定的排列起来，它就可以构成我们的意识。单个脑细胞显然不能意识到任何东西，但是许多脑细胞按照特定的模式组合起来，“意识”就在组合中产生了。好比软件无法脱离硬件单独运行，意识的体现不可能脱离物质而进行。

人们一般能够达成共识的是，并非大脑的所有活动都是“意识”，事实上大脑的许多活动是我们本身意识不到的，我们并不能参控它运行的整个过程。“意识”还似乎与我们的记忆相关，需要记忆来完成不经意间的动作，包含梦境。

当然，我们所说的意识或者梦境，只包含人类；其他的动物、蚯蚓之类，无法验证，我们不去深究。

我曾经做过一个梦

我曾经做过一个梦，梦境里面经历了整整2年的时光。

我当时已经工作了大约有5年，梦境中我辞职回到了的校园，时间点是大四时期。我在学校里面重新开始上课、学习、考试、打球、去食堂打饭、睡觉，与同学之间的交流不多，或许这个大脑模拟起来太费劲，就给我省略掉了。

其中，离家的孤独、上课的无聊、以及考试的痛苦我都能实在的感受得到，因为毕竟毕业比较久远，有些题目我不会做啊！大脑可能让我进入了人生艰难模式吧——大脑你开什么玩笑。

好了，到这里，同学们一定疑惑，这个梦的目的是什么？对，我是去重新挽回一段感情！虽然这段感情在现实中已经结束3年了吧，但我的确是重新回到那个时光中了。可是，我没有找到她。我在校园里面找了一年，我都无法跟她重遇。然后，毕业，到现实中她生活工作的城，开始新的一年生活。

岁末，我终于到达终点，一座黄昏下笼罩着圣诞味道的别墅，温暖的灯从窗户透出，巨大的圣诞树，伴随着清脆的铃声，我听到了她和别人在欢笑，还有几个孩子的身影，投射在窗台上。

那一瞬间，我泪流满面，清晰的感觉到旅程结束，自己身体某部分死了，然后又活了，时光重新在身体里面流动。

我醒了。

结局

梦中死去，其实就是梦的结局。你的身体或者你的大脑，其实是在保护你，如果你实在有无法完成执念，或者放不下的事情，大脑会让你选择经历一回，死去一回；放下了纠结，对身体是有巨大的好处的。

所以，梦中完蛋了，没什么大不了的事情，只是你新生的开始而已。

你要问这什么科学解释？这是我个人经历，科学连意识都解释不了，要解梦，还是问周公好点。

还是意犹未尽的同学，建议重温盗梦空间，更后的陀螺是不是还在旋转呢？

我是猫先生，感谢阅读。

3、提取基因组的方法有几种

提取基因组DNA和细胞核DNA是不同的方法

提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核,要在甘油或其他保护剂中进行

SDS十二烷基磺酸钠：可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA分离

CATB是一种抽提液,破坏细胞膜的~具体忘了~

DNA不溶于异丙醇,异丙醇可以析出DNA,产生白色絮状沉淀,用枪头挑出就可以了

以下是一些具体方法,希望有用

基因组DNA提取方法

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤,通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法,其他的方法还有1物理玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法.2化学异硫氰酸胍法,碱裂解法3生物酶法。根据核酸分离纯化的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等

试验步骤：

1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。

2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。试验步骤2再重新作一边。

3、加入5mlDNA提取缓冲液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混匀。

4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h,

5、用等体积的酚抽提一次,2500rpm离心收集水相,用等体积的（酚,氯仿,异戊醇）混合物抽提一次,2500r/min离心收集水相

6、用等体积的氯仿,异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀,冰浴,10min。。

7、2500rpm离心10min。转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。温10min。

2500rpm,离心10min。弃上清。

8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min,温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。

外周血DNA提取技术

分离外周血白细胞提取方法：

试验步骤：

1、取人肘静脉血5ml,EDTA抗凝,2500rpm离心10min。

2、小心吸取上血浆,分装到3个0.5ml离心管中。

3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液,摇匀,冰浴min。

4、2500rpm离心10min,弃上清。

5、加入10ml溶血液,摇匀,冰浴min。

6、3000rpm离心10min,弃上清。

7、倒置离心管,去掉残液。

8、得白细胞,－80?C冻存。

试验要求：

血至分离白细胞之间隔时间在温下放置不超过2h,4℃放置不超过5h,以防白细胞自溶。

氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA：

试验试剂：

Ligsisbuffer：

3mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml；更后加灭菌去离子水至1000ml,高压灭菌。

ACD抗凝剂：柠檬酸1.68g柠檬酸钠4.62g葡萄糖5.g；更后加灭菌去离子水至350ml,高压灭菌。

提取缓冲液（Extractionbuffer）：

10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris。Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDTA(PH=8.0)20ml0.5%SDS10%SDS0.5ml；更后加灭菌去离子水至100ml,高压灭菌

试验步骤：

1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl,充分颠混至清亮。以0rpm,离心5min。弃上清液。

2、沉淀中加入ligsisbuffer00μl,充分匀浆。以6000rpm,离心5min。

3、彻底弃去上清,加入extractionbuffer500μl（裂解细胞）,混匀置于37℃,水溶1h。

4、加入8μl的蛋白酶K,颠混,37℃过夜（或55℃,3h,但是37℃效果要好些）。

5、每管加入450μl饱和酚（取溶液下）缓慢摇晃10min,以5500rpm,离心min。

6、取上清,每管加入250μl饱和酚和250μl氯仿－异戊醇,摇匀10min,以5500rpm,离心min。

7、取上清,每管加入500μl氯仿－异戊醇,摇匀10min,以5500rpm,离心min。

8、取上清,每管加50μl的3M的NaAC＋,适量无水乙醇（预冷）至满,摇匀放入-20℃保存2h以上。

9、以12000rpm,离心20min。去上清,加入70％乙醇500μl,以12000rpm,离心5min,去上清,50－60℃干燥。

10、加入50μl灭菌去离子水,转弹,混匀。

NaI提取法提取外周血白细胞基因组：

实验步骤：

1、取外周抗凝血（全血）100ul于eppendorf管中,12000rpm离心12min。

2、弃上清,加双蒸水200ul溶解,摇匀20s。

3、混匀后加6MNaI溶液200ul,摇匀20s。

4、加入氯仿/异戊醇（24：1）ul,边加边摇,摇匀20s,12000rpm离心12min。

5、取上液350ul,加入另一新eppendorf管中,加0.6倍体积异丙醇,摇匀20s,温放置min,静置后的反应体系000rpm离心12min,使沉淀紧贴eppendorf管壁。

6、弃异丙醇,加70％乙醇1ml（不振动）,以000rpm离心12min。

7、弃乙醇,敞开eppendorf管盖,烘干（37℃恒温箱）后,加1xTE溶液30ul,溶解DNA＞12h以上,制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。

常用的外周血白细胞基因提取方法：

试验原理：

苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂,反复抽提,使蛋白质变性,SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解,在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子,核蛋白变性降解,使DNA从核蛋白中游离出来。DNA易溶于水,不溶于有机溶剂。蛋白质分子表面带有亲水基团,也容易进行水合作用,并在表面形成一水化,使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时,蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏,变性沉淀。离心后有机溶剂在试管底(有机相),DNA存在于上水相中,蛋白质则沉淀于两相之间。酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在1/103mol/LNaCl存在下沉淀DNA,回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐,真空干燥,用TE缓冲液溶解DNA备用。

试验步骤：

1、将1mlEDTA抗凝贮冻血液于温解冻后移入5ml离心管中,加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS）,混匀,3500rpm离心min,倾去含裂解红细胞的上清。重复一次。用0.7mlDNA提取液混悬白细胞沉淀,37℃水浴温育1h。

2、将上述DNA提取液混悬白细胞,37℃水浴温育1h后,加入1mg/ml蛋白酶K0.2ml,至终浓度为100-200ug/ml,上下转动混匀,液体变粘稠.50℃水浴保温3h,裂解细胞,消化蛋白。保温过程中,应不时上下转动几次,混匀反应液。

3、反应液冷却至温后,加入等体积的饱和酚溶液,温和地上下转动离心管5-10min,直至水相与酚相混匀成乳状液.5000rpm离心min,用大口吸管小心吸取上粘稠水相,移至另一离心管中。重复酚抽提一次。加等体积的氯仿：异戊醇（24：1）,上下转动混匀,5000rpm离心min,用大口吸管小心吸取上粘稠水相,移至另一离心管中。重复一次。

4、加入1/5体积的3mol/LNaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇,温下慢慢摇动离心管,即有乳白色云絮状DNA出现。用玻璃棒小心挑取云絮状的DNA,转入另一1.5ml离心管中,加70%乙醇0.2ml,以5000rpm离心5min。洗涤DNA,弃上清,去除残留的盐。重复一次。温挥发残留的乙醇,但不要让DNA完全干燥。加TE液20ul溶解DNA,置于摇床平台缓慢摇动,DNA完全溶解通常需12-24h。制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。

真核细胞DNA的制备

一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析,还可用于PCR的模板、文库构建等实验。

根据材料来源不同,采取不同的材料处理方法,而后的DNA提取方法大体类似,但都应考虑以下两个原则：

1、防止和抑制DNase对DNA的降解。

2、尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏。

试剂准备：

1、TE:10mMTris-HCl(pH7.8);1mMEDTA(pH8.0)。

2、TBS:25mMTris-HCl(pH7.4);200mMNaCl;5mMKCl。

3、裂解缓冲液：250mMSDS;使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。

4、20%SDS

5、2mg/ml蛋白酶K

6、Tris饱和酚（pH8.0）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿

7、无水乙醇、75%乙醇

试验步骤：

材料处理：

1、新鲜或冰冻组织处理：

1)取组织块0.3-0.5cm3,剪碎,加TE0.5ml,转移到匀浆器中匀浆。

2)将匀浆液转移到1.5ml离心管中。

3)加20%SDS25ml,蛋白酶K(2mg/ml)25ml,混匀。

4)60°C水浴1-3hr。

2、培养细胞处理：

1)将培养细胞悬浮后,用TBS洗涤一次。

2)离心0g×5min,去除上清液。

3)加10倍体积的裂解缓冲液。

4)50-55°C水浴1-2hr。

DNA提取：

1、加等体积饱和酚至上述样品处理液中,温和、充分混匀3min。

2、离心5000g×10min,取上水相到另一1.5ml离心管中。

3、加等体积饱和酚,混匀,离心5000g×10min,取上水相到另一管中。

4、加等体积酚/氯仿,轻轻混匀,离心5000g×10min,取上水相到另一管中。如水相仍不澄清,可重复此步骤数次。

5、加等体积氯仿,轻轻混匀,离心5000g×10min,取上水相到另一管中。

6、加1/10体积的3M醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积的无水乙醇,轻轻倒置混匀。

7、待絮状物出现后,离心5000g×5min,弃上清液。

8、沉淀用75%乙醇洗涤,离心5000g×3min,弃上清液。

9、温下挥发乙醇,待沉淀将近透明后加50-100mlTE溶解过夜。

植物组织中DNA的提取

试验原理：

脱氧核糖核酸（deoxribonucleicacid,DNA）是一切生物细胞的重要组成成分,主要存在于细胞核中,盐溶法是提取DNA的常规技术之一。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA,其中还含有大量RNA,即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。DNA不溶于0.14mol/L的NaCl溶液中,而RNA则能溶于0.14mol/L的NaCl溶液之中,利用这一性质就可以将二者从破碎细胞浆液中分开。制备过程中,细胞破碎的同时就有Dnase释放到提取液中,使DNA因被降解而影响得率,在提取缓冲液中加入适量的柠檬酸盐和EDTA,既可抑制酶的活性又可使蛋白质变性而与核酸分离,再加入阴离子去垢剂0.％的SDS,经过2h搅拌,或用氯仿－异醇除去蛋白,通过离心使蛋白质沉淀而除去,得到的是含有核酸的上清液。然后用95％的预冷乙醇即可把DNA从除去蛋白质的提取液中沉淀出来。

植物DNA的SDS提取法：

试验试剂：

1、研磨缓冲液：称取59.63gNaCl,.25g柠檬酸三钠,37.2gEDTA－Na分别溶解后合并为一,用0.2mol/L的NaOH调至pH7.0,并定容至1000ml。

2、10×SSC溶液：称取87.66gNaCl和44.12g柠檬酸三钠,分别溶解,一起定容至1000ml。

3、1×SSC溶液：用10×SSC溶液稀释10倍。

4、0.1×SSC溶液：用1×SSC溶液稀释10倍。

5、Rnase溶液：用0.14mol/LNaCl溶液配制成25mg/ml的酶液,用1mol/LHCl,pH至5.0,使用前经80℃水浴处理5min（以破坏可能存在的Dnase）。

6、氯仿－异戊醇：按24ml氯仿和1ml异戊醇混合。

7、5mol/L高氯酸钠溶液：称取NaClO4．H2O70.23g,先加入少量蒸馏水溶解再容至100ml。

8、SDS（十二烷基硫酸钠）化学试剂的重结晶：将SDS放入无水酒精中达到饱和为止,然后在70～80℃的水浴中溶解,趁热过滤,冷却之后即将滤液放入冰箱,待结晶出现再置温下凉干待用。

9、1mol／LHCl。

10、0.2mol/LNaOH。

11、二苯胺乙醛试剂：1.5g二苯胺溶于100ml冰醋酸中,添加1.5ml浓硫酸,装入棕色瓶,贮存暗处,使用时加0.1ml乙醛液〔浓乙醛：H2O＝1：50（V／V）〕。

12、1.0mol/L高酸溶液（HClO4）。

、0.05mol/LNaOH。

14、DNA标准液：取标准DNA25mg溶于少量0.05mol。L-1NaOH中,再用0.05mol/LNaOH定容至25ml,后用移溶管吸取此液5ml至50ml容量瓶中,加5.0ml1mol/LHClO4,混合冷却后用0.5mol/LHClO4定容至刻度,则得100μg/ml的标准溶液。

实验步骤：

1、称取植物幼嫩组织10g剪碎置研钵中,加10ml预冷研磨缓冲液并加入0.1g左右的SDS,置冰浴上研磨成糊状。

2、将匀浆无损转入25ml刻度试管中加入等体积的氯仿－异戊醇混合液,加上塞子,剧烈振荡30s,转入离心管,静置片刻以脱除组织蛋白质。以0rpm离心5min。

3、离心形成三,小心地吸取上清液至刻度试管中,弃去中间的细胞碎片、变性蛋白质及下的氯仿。

4、将试管置72℃水浴中保温3min（不超过4min）,以灭活组织的DNA酶,然后迅速取出试管置冰水浴中冷却到温,加5mol/L高氯酸钠溶液〔提取液：高氯酸钠溶液＝4：1（V／V）〕,使溶液中高氯酸钠的更终浓度为1mol/L。

5、再次加入等体积氯仿－异戊醇混合液至大试管中,振荡1min,静置后在温下离心（0rpm）5min,取上清液置小烧杯中。

6、用滴管吸95％的预冷乙醇,慢慢地加入烧杯中上清液的表面上,直至乙醇的体积为上清液的两倍,用玻璃棒轻轻搅动。此时核酸迅速以纤维状沉淀缠绕在玻璃棒上。

7、然后加入0.5ml左右的10×SSC,使更终浓度为1×SSC。

8、重复第6步骤和第7步骤即得到DNA的粗制品。

9、加入已处理的Rnase溶液,使其更后的作用浓度为50～70μg/ml,并在37℃水浴中保温30min,以除去RNA。

10、加入等体积的氯仿－异戊醇混合液,在三角瓶中振荡1min,再除去残留蛋白质及所加Rnase蛋白,温下以0rpm离心5min,收集上水溶液。

11、再按6、7步骤处理即可得到纯化的DNA液。

植物DNA的CTAB提取法：

试验步骤：

1、称取新鲜叶片2-3g,剪碎放入研钵中,在液氮中研磨成粉末。

2、将粉末转移到加有7ml经预热的×CTAB提取缓冲液ml离心管中,迅速混匀后置于65℃水浴中,温育30min。

3、取出离心管,冷却至温,加入氯仿/异戊醇(24:1),充分混匀,温下2300转离心20min。

4、将上清转移至另一新的ml离心管中,加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯仿/异戊醇。充分混匀,2300rpm离心20min。

5、转移上清至另一新的ml离心管中,加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液,轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀.1000rpm离心10min,使DNA沉淀于管底。

6、加入1.5-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中过夜。

7、待DNA完全溶解后,加2-3ml4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀,挑出DNA,置于ml离心管中,用70%乙醇清洗30min。

8、离心机甩5s,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5min,倒出95%乙醇,在超净工作台上吹干。

9、将风干的DNA直接在4℃保存备用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存。

细菌DNA的提取方法

针对一些不易于提取的细菌的方法:

试验试剂：

抽提缓冲液：2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)（去色素）100mMTris-HCl(pH8.0)

25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl

10MLiCl

2MLiCl

DEPC-water（抑制RNA酶活性）

3MNaAc(pH5.2)

96%乙醇

70%乙醇

试验步骤：

1、抽提缓冲液65℃预热。

2、加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀,65℃,10min。

3、加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）,振荡,以12,000rpm,离心10min。

4、取上清,加氯仿/异戊醇（24：1）振荡,以12,000rpm,离心10min。

5、重复再作一次步骤4、

6、加入1/10体积的3M醋酸钠和1.5倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇）,－20C下沉淀。

7、以2,000rpm,离心10min。

8、弃上清,以70％乙醇条洗沉淀,也可以再用100％乙醇洗,然后溶解于100ml水中。

较为常用的细菌DNA提取方法：

实验步骤：

1、将菌株接种于液体LB培养基,37℃震荡培养过夜。

2、取1.5ml培养物12000rpm离心2min。

3、沉淀中加入567ul的TE缓冲液,反复吹打使之重新悬浮,加入30ul10%SDS和ul的蛋白酶K,混匀,于37℃温育1h。

4、加入100ul5mol/LNaCl,充分混匀,再加入80ulCTAB/NaCl溶液,混匀后再65℃温育10min。

5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀,离心4-5min,将上清转入一只新管中,加入0.6-0.8倍体积的异丙醇,轻轻混合直到DNA沉淀下来,沉淀可稍加离心。

6、沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后,离心弃乙醇．

真菌DNA提取的两种方法：

种方法：

试验步骤：

1、取真菌菌丝0.5g,在液氮中迅速研磨成粉。

2、加入4mL提取液,快速振荡混匀。

3、加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1),涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚）。

4、以4℃,1000rpm,离心5min。

5、上清再用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次。以4℃,10,000rpm,离心5min。

6、取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀,混匀,静置约30min。

7、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,重悬于500ulTE中。

8、加入1ulRNaseA（10mg/mL）,37℃下处理1h。

9、用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃,10,000rpm,离心5min。

10、取上清,加入1/10倍体积的3MNaAc,2.5倍体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。

11、沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中,-20℃保存备用。

DNA提取液：0.2MTris-HCl（pH7.5）,0.5MNaCl,0.01MEDTA,1％SDS,3MNaAc。

第二种方法：

试验步骤：

1、真菌菌丝0.5-1g,在液氮中迅速研磨成粉。

2、加入3mL65℃预热的DNA提取缓冲液,快速振荡混匀65℃水浴30min,期间混匀2-3次。

3、加入1mL5MKAc,冰浴20min。

4、等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000rpm,4℃离心5min）。

5、取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,静置约30min。

6、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,重悬于500ulTE中。

7、加入1ulRNaseA（10mg/mL）,37℃处理1h。

8、用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃,10,000rpm,离心5min。

9、取上清,1/10V3MNaAc,2.5V体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。

10、沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中,-20℃保存备用。

植物基因组提取(CATB法)

作者： 时间： 来源: 生物谷 浏览评论

一、实验目的

掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。

二、实验原理

通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。

十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide,简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)等离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂,能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,即得植物总DNA溶液。

三、实验材料

水稻幼叶

四、主要配方

2% CTAB抽提缓冲溶液: CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml,先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌, 冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇 （ul） 氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿,再加4ml异戊醇,摇匀即可。

五、实验步骤

1、 DNA的提取

（1） 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。

（2）取少量叶片（约1g）置于研钵中,用液氮磨至粉状；

（3） 加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液,轻轻搅动；

（4） 将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌中,磨碎液的高度约占管的三分之二；

（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中,每隔10 min轻轻摇动,40 min后取出；

（6）冷却2 min后,加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管,剧烈振荡2~3 min,使两者混合均匀；

（7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min,与此同时,将600 µl的异丙醇加入另一新的灭菌中；

（8） 10 000 rpm离心1 min后,移液器轻轻地吸取上清夜,转入含有异丙醇的内,将离心管慢慢上下摇动30 sec,使异丙醇与水充分混合至能见到DNA絮状物；

（9）10000 rpm离心1 min后,立即倒掉液体,注意勿将白色DNA沉淀倒出,将离心管倒立于铺开的纸巾上； （10）60 sec后,直立离心管,加入720 µl的75%乙醇及80 µl 5 M的醋酸钠,轻轻转动,用手指弹管尖,使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中；

（11）放置30 min,使DNA块状物的不纯物溶解；

（12）10000 rpm离心1 min后,倒掉液体,再加入800 µl 75%的乙醇,将DNA再洗 30 min；

（）10000 rpm离心30 sec后,立即倒掉液体,将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后,直立离心管,干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）；

（14）加入50 µl 0.5 × TE(含RNase)缓冲液,使DNA溶解,置于37℃恒温箱约 h,使RNA消解；

（）置于-20℃保存、备用。

2、 DNA质量检测

琼脂糖电泳检测,原理和方法见实验二。

六、 注意事项

（1）叶片磨得越细越好。

（2）移液器的使用。

（3）由于植物细胞中含有大量的DNA酶,因此,除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外,步的操作应迅速,以免组织解冻,导致细胞裂解,释放出DNA酶,使DNA降解。

4、漫威漫画里出现过的死侍的“无限内裤”有什么能力

其实所谓的“死侍的无限内裤”仅仅只是漫画无限战争中的一个“特制版封面”，本身是没有什么剧情设定和能力的。

在漫威宇宙中，利用无限宝石制造的武器或者是装备不算多，但也不算少，除了我们比较熟悉的“无限手套”以外，其实在设定漫威的各个支线或者是动画中无限宝石还曾经有过其他的装备姿态！

比如：漫威动画复仇者集结中，曾经出现在寡姐身上的“无限宝石项链”，当然，需要知道的是这款无限宝石项链，本身并非是全部宝石，动画中只有4颗宝石。

但是在威力上已经让寡姐战斗力飙升，成功怼翻了想要抢夺宝石的多玛姆。

又比如：在漫画无限战争中，接连出现的利用无限宝石的装备“无限巨剑”、“无限铠甲”以及所谓的“无限内裤”。

熟悉漫画无限战争的粉丝应该都清楚，其实在这部漫画中起因源自于各种搞事情的卡魔拉——

故事中因为无限战争前传漫画中，卡魔拉体内一部分灵魂被困在了灵魂宝石中，所以缺少一部分灵魂的卡魔拉迫切渴望这部分灵魂回归到自己身体中，以至于开始走上了灭霸的老，收集无限宝石。漫画中，卡魔拉希望用宝石之力打开灵魂空间放出自己的灵魂。

而在收集过程中，卡魔拉一度将力量宝石镶嵌在了一把大剑上，顿时让这柄大剑成为了无限武器，一剑就给灭霸送了盒饭。

之后更是为了收集宝石怒怼复仇者。

而与此同时，在这部漫画的平行时空中，的主人其实是另一个时空的雷神洛基！

在这个时空中，洛基的人设就是翻版的雷神托尔，因此具备了举起雷神之锤的资格，并且在他的时空中，还收集全了所有的无限宝石，并将其制造成为了无限战甲。

当然，比较尴尬的是：

这些无限宝石只能在洛基自己的时空中有效果，在其他的宇宙时空中貌似就是几块颜色好看的宝石罢了。

而至于“无限宝石内裤”：

本身也就是一版特质封面，属于漫威借助死侍玩的一个穿越梗，本身你要说作用，emmmmm，估计就是耐穿就是了。

本文图盘源自网络，侵删~

5、细胞和原子每分钟都在快速的自转，动力来自哪里

自然界的4种基本力:万有引力、电磁相互作用力、弱相互作用力、强相互作用力。

先从原子说起，原子是一切物质分子的基础形态，原子的初始力量来自于宇宙能量的单元化存储过程，宇宙所有的能量逐一的存储在各个原子中类似电脑硬盘的原理一样，每个扇存储一定的信息量。原子并不是宇宙更小单元，原子是宏观与微观的临界位置，通过原子显微镜目前可以看到原子但再往小的尺度的电子。夸克。中微子等等就全都看不见了。

宇宙能量基本单元

将原子放大到宇宙一样大小时宇宙的更基本单元的大小只相当于地球上一颗6米高的大树而已，可见原子内部又是一个像宇宙一样复杂的世界。宇宙更基本单元在宏观上唯一能被侦查的逻辑是电荷性质，至于基本单元目前到底是什么说法不一，笔者大胆推测基本单元是以光速旋转的能量电荷，无数的基本单元组成基本原子，原子内部基本单元的光速旋转在宇宙重力的作用下引起原子宏观上的自旋。电子每秒运动2200公里，对于电子这只是我们能够测算的宏观速度，电子内部一样有无数的宇宙基本能量电荷。电子的运动是跳跃式的并不是我们所理解的地球绕太阳的星体运动，当年日本科学家拿出电子绕核圆周运动的图形也只是为了民众方便理解电子的运动而已。电子的宏观电磁波与原子宏观电磁波干涉的电磁波交叉位置会出现电子的粒子性质。电子在新位置出现的一瞬间从新释放电磁波与原子电磁波干涉，电子就会跳跃到新的位置，往复循环着。

电子云

当电子受原子外能量干扰时会力量跃迁并释放光子，光子能够以光速飞行的原因是电子内的宇宙基本单元本身就是光速运动，释放出光子时的速度不是从静止加速到光速的，而是本来就是以光速运动这样才比较合理。电子能释放的粒子不仅仅是光子，其他粒子也可以释放出去。这都源于宇宙所有粒子均是一种基本单元构成的事实。

原子通过电子与外界原子的能量交换过程即是宏观的分子形成的基本原因。原子内部的强核力是宇宙存在的基石，原子与原子的联络主要收弱相互作用力影响。强核力只保证原子的稳定性，不参与原子与原子的联络或者说原子强核力对其他原子影响比较小，还有就是引力对原子级别的影响比较小。

在68年，电磁与弱相互作用统一了，它们是同一种力的两个方面，现在叫电弱力。电弱力影响原子的衰变过程。电弱力的影响会覆盖整个原子团系统，包括衰变及原子间的电磁影响。

细胞分子团

细胞是有机分子团，是自然形成一种能量循环的智能原子集合。细胞的自旋是更加宏观的分子级别运动状态，他与原子的自旋及原子团之间的宏观电弱力有关。

细胞通过分子级别的吐纳完成能量的实质换过程以维持细胞分子团的现有结构并有所发展或为裂变出新的细胞做准备。当细胞的RNA的复制次数到达进化预设上线时细胞开始衰老退化直至死亡。

综上可知细胞自旋动力受原子自旋影响，原子自旋受宇宙基本单元的运动影响，并都统一在宇宙重力之中。宇宙基本单元的动力来自于宇宙诞生及运行的状态，笔者一直坚持认为宇宙以光速运动自旋，从而保证宇宙基本单元与之共振光速自旋运动。在能量的世界没有时间概念从而保证量子纠缠的超距作用。

如果您有更好的对量子纠缠的理解请留言一起探讨，如果没有就等你有了再来探讨。

————天美波罗蜜多

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